繰返し配列DNAを認識する制御蛋白質の高次構造研究

识别重复 DNA 序列的调节蛋白的高阶结构研究

• 批准号: 06680651
• 负责人: 箱嶋 敏雄
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680651/
• 关键词: 構造生物学; 結晶化; 蛋白質の構造; DNAの構造; 複合体

制御蛋白質としてヒトインターフェロン調節因子であるIRF-2のDNA結合ドメインに注目して、その遺伝子光学的な大量調製を行った。精製の段階で、このドメインが空気酸化されて二量体を形成することが判明したので、大量のメルカプトエタノール(50mM)で還元状態を保って精製する系を確率し、資料の調製を行った。このドメインが認識するDNAとしては、種々の配列をもつDNAオハコマ-との共結晶科の結果13dと呼ばれるDNA,5′-A AAGTGAAAGTGATTCACTTTCACTTと共結晶化し、それが結晶成長する条件を見い出すことができた。現在の条件では、0.2mm程度の大きさまで、数日間で成長できる。この13dのDNAの誘導体DNAをも合成し、それとの共結晶化を試してみるとともに、13dとの複合体結晶の予備的なX線の回折実験を現在行っているところである。

以人干扰素调节剂为调节蛋白的IRF-2的DNA结合结构域，进行了基因 - 光量质量制剂。在纯化阶段，发现该结构域被氧化以形成二聚体，因此寻求一个系统以保持降低的状态，并具有大量的墨托乙醇（50 mm），并进行了材料的准备。正如该结构域认可的DNA一样，具有各种序列的DNA共结晶与DNA共结晶，与DNA共结晶，5'-A-A AAGTGAAAGTGATTCACTTT，称为13D，并发现了晶体生长的条件。在当前条件下，它可以在几天内生长到约0.2mm的大小。我们还合成了这个13D DNA衍生DNA，并尝试了与之共结晶，目前正在使用13D进行复杂晶体的初步X射线衍射实验。