课题基金 / 基金详情

微小管ダイナミックス制御の構造的基礎

微小管ダイナミックス制御の構造的基礎
微管动力学控制的结构基础
批准号：
19037017
负责人：
箱嶋 敏雄
金额：
$3.84万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2007 至 2008
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19037017/
关键词：
CLIP-170チューブリンEB1APCCLASP

项目摘要

项目成果

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翻译
本年度は, CLASPのEB1やチューブリンや微小管結合ドメインの試料調製を進めるとともに相互作用を解析した. 先ず, in vivoの機能解析が進んでいるCLASP2γを用いて, EB1との結合に関与するドメインの種々の発現コンストラクトを作成して, 大腸菌をホストとした高効率の調製系を確立した. 発現タンパク質のGSTタグを利用して, 簡便なpull-downアッセイでEB1と結合する領域を同定した. 更に, この最小の結合領域を用いて, EB1-CLASP2γ複合体を結晶化ロボット(既設のHYDRA-II)を用いて結晶化スクリーニングした. その結果, 複合体結晶を得られたので, セレノメチオニン誘導試料結晶も調製して, SPring-8での放射光実験によりx線強度データを収集した. MAD法とMRを組み合わせて位相決定して, 複合体構造を精密化した. その結果, EB1のα-らせんの束が形成する疎水性ポケットにCLASP2γのIPモチーフが結合していることが明らかとなった.さらに, IPモチーフの周辺の相互作用に重要な残基も同定した. 今後, 得られた構造に基づいた点変異実験を組み合わせた機能解析により, 特異性に重要な残基を決定するとともに, チューブリンや微小管、他の+TIPとCLASPとの間の相互作用の関係, 正または負に干渉する, あるいは全く干渉しない, を解析して機能との関係を考察した後に, 論文としてまとめる.
英文摘要
本年度は, CLASPのEB1やチューブリンや微小管結合ドメインの試料調製を進めるとともに相互作用を解析した. 先ず, in vivoの機能解析が進んでいるCLASP2γを用いて, EB1との結合に関与するドメインの種々の発現コンストラクトを作成して, 大腸菌をホストとした高効率の調製系を確立した. 発現タンパク質のGSTタグを利用して, 簡便なpull-downアッセイでEB1と結合する領域を同定した. 更に, この最小の結合領域を用いて, EB1-CLASP2γ複合体を結晶化ロボット(既設のHYDRA-II)を用いて結晶化スクリーニングした. その結果, 複合体結晶を得られたので, セレノメチオニン誘導試料結晶も調製して, SPring-8での放射光実験によりx線強度データを収集した. MAD法とMRを組み合わせて位相決定して, 複合体構造を精密化した. その結果, EB1のα-らせんの束が形成する疎水性ポケットにCLASP2γのIPモチーフが結合していることが明らかとなった.さらに, IPモチーフの周辺の相互作用に重要な残基も同定した. 今後, 得られた構造に基づいた点変異実験を組み合わせた機能解析により, 特異性に重要な残基を決定するとともに, チューブリンや微小管、他の+TIPとCLASPとの間の相互作用の関係, 正または負に干渉する, あるいは全く干渉しない, を解析して機能との関係を考察した後に, 論文としてまとめる.
期刊论文(32)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
CLIP-170による微小管認識機構
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DOI： --
发表时间： 2007
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发表时间： 2008
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影响因子： --
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通讯作者： S.
微小管制御因子EB1の構造解析
微管调节因子EB1的结构分析
DOI： --
发表时间： 2008
期刊：
影响因子： --
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通讯作者： 金場哲平
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DOI： --
发表时间： 2009
期刊：
影响因子： --
作者： [村瀬浩司, 平野良憲, Tai-ping Sun, 箱嶋敏雄]
通讯作者： 箱嶋敏雄
共 31 条
    癌細胞の浸潤・転移関連RacGEFと細胞接着分子の構造生物学
    • 批准号：
      20011006
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $6.34万
    • 财政年份：
      2008
    • 负责人：
      箱嶋 敏雄
    • 依托单位：
      Nara Institute of Science and Technology
    細胞膜足場形成の多次元複合体の構造生物学
    • 批准号：
      20051017
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.97万
    • 财政年份：
      2008
    • 负责人：
      箱嶋 敏雄
    • 依托单位：
      Nara Institute of Science and Technology
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    • 批准号：
      19036014
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.9万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      箱嶋 敏雄
    • 依托单位：
      Nara Institute of Science and Technology
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    • 批准号：
      12147206
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $32.9万
    • 财政年份：
      2000
    • 负责人：
      箱嶋 敏雄
    • 依托单位：
      Nara Institute of Science and Technology
    海外基金