微小管ダイナミックス制御の構造的基礎

微管动力学控制的结构基础

• 批准号: 19037017
• 负责人: 箱嶋 敏雄
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19037017/
• 关键词: CLIP-170; チューブリン; EB1; APC; CLASP

本年度は, CLASPのEB1やチューブリンや微小管結合ドメインの試料調製を進めるとともに相互作用を解析した. 先ず, in vivoの機能解析が進んでいるCLASP2γを用いて, EB1との結合に関与するドメインの種々の発現コンストラクトを作成して, 大腸菌をホストとした高効率の調製系を確立した. 発現タンパク質のGSTタグを利用して, 簡便なpull-downアッセイでEB1と結合する領域を同定した. 更に, この最小の結合領域を用いて, EB1-CLASP2γ複合体を結晶化ロボット(既設のHYDRA-II)を用いて結晶化スクリーニングした. その結果, 複合体結晶を得られたので, セレノメチオニン誘導試料結晶も調製して, SPring-8での放射光実験によりx線強度データを収集した. MAD法とMRを組み合わせて位相決定して, 複合体構造を精密化した. その結果, EB1のα-らせんの束が形成する疎水性ポケットにCLASP2γのIPモチーフが結合していることが明らかとなった.さらに, IPモチーフの周辺の相互作用に重要な残基も同定した. 今後, 得られた構造に基づいた点変異実験を組み合わせた機能解析により, 特異性に重要な残基を決定するとともに, チューブリンや微小管、他の+TIPとCLASPとの間の相互作用の関係, 正または負に干渉する, あるいは全く干渉しない, を解析して機能との関係を考察した後に, 論文としてまとめる.

This year, CLASP EB1 is a micro-tube bonding agent for sample modulation. First of all, in vivo function analysis to advance the use of CLASP2γ, EB1 and the combination of related to the development of species, the development of species, Escherichia coli, high efficiency modulation system to establish. It is easy to pull-down and combine EB1 and EB2 in the same field. Furthermore, the minimum binding domain is used, and the crystallization of EB1-CLASP2 γ complex (even HYDRA-II) is used. As a result, the crystallization of the complex was obtained, and the X-ray intensity of SPring-8 was measured. MAD method and MR method are used to determine the phase and structure of the complex. As a result, EB1 α-ray bundle is formed, and the aqueous phase of CLASP2γ IP bundle is combined. In addition, important residues are identified in the interaction between IP and the periphery. In the future, we will find that there are some differences in the structure, and some important residues in the analysis.

项目成果

CLIP-170による微小管認識機構

CLIP-170的微管识别机制

• 发表时间: 2007
• 作者: Katsumura;T.;Oda;S.;Mitani;H.;Kawamura;S.;Oota;H.;A.Terakita;三島正規
• 通讯作者: 三島正規

微小管制御因子EB1の構造解析

微管调节因子EB1的结构分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Sumiya;H.;K.Wakabayashi;金場哲平
• 通讯作者: 金場哲平

Crystallographic characterization of the radixin FERM domain bound to the cytoplasmic tail of membrane-type 1 matrix metalloproteinase(MT1-MMP)

与膜型 1 基质金属蛋白酶 (MT1-MMP) 胞质尾部结合的根素 FERM 结构域的晶体学表征

• 发表时间: 2008
• 期刊: Acta Crystallogr.F 64
• 作者: Terawaki;S.
• 通讯作者: S.

植物核内受容体の作用機構

植物核受体的作用机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 村瀬浩司;平野良憲;Tai-ping Sun;箱嶋敏雄
• 通讯作者: 箱嶋敏雄

血管収縮阻害剤: Rhoキナーゼの構造と機能

血管收缩抑制剂：Rho 激酶结构和功能

• 发表时间: 2008
• 期刊: 医薬ジャーナル 44
• 作者: 合田圭吾