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Nrf2を介した転写制御機構の分子基盤の解析

Nrf2介导的转录调控机制的分子基础分析

基本信息

批准号：
20052001
负责人：
伊東健
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の実験を実施した.1.Nrf2によって構成される核内複合体の精製・同定 : Nrf2が形成する転写複合体を精製するために,FLAGタグを融合したNrf2タンパク質をテトラサイクリン誘導的に発現する細胞を作製し,抗FLAG抗体によるアフィニティー精製を行った.現在,検出されたタンパク質をLC/MSにより決定中である.2.クロマチンリモデリング因子BRG1のNrf2転写活性化における機能解析 : 以前我々は,酸化ストレスによるNrf2依存的遺伝子発現において,BRG1がHO-1遺伝子の発現を選択的に増強することを見出した.その選択的発現機構の詳細を調べるために,siRNAによりBRG1発現を抑制し,遺伝子制御領域へのNrf2結合をChIPにより解析した.その結果,HO-1制御領域特異的にNrf2結合が低下していた.この結果から,BRG1がNrf2のDNA結合に関与することがわかった.3.転写を活性化するZ-DNAのNrf2依存的形成機構の解析 : BRG1はプリンーピリミジン塩基配列を左巻きDNAであるZ-DNA構造に変換することが知られている.また我々はHO-1遺伝子発現制御領域にZ-DNA形成配列を見出した,そこで,細胞内でのZ-DNA形成を検討するために,Z-DNA結合タンパク質とEGFPの融合タンパク質を発現する構築を作製した.現在,HO-1発現制御領域についてZ-DNA形成を検討中である.4.マクロファージにおけるCD36遺伝子の発現調節機構解析 : CD36は長鎖脂肪酸や酸化LDLの受容体である.またNrf2ノックアウトマウス由来のマクロファージでは,Nrf2活性化剤によるCD36遺伝子の発現誘導は消失しているが,その制御機構は明らかでない.我々はまずマクロファージにおけるCD36遺伝子の第1エクソンを決定した.つづいてその制御領域について検討し,Nrf2が結合するARE配列を見出した.さらにChIPおよびレポーター解析により,Nrf2依存的CD36遺伝子の発現誘導に必要なARE配列を決定した.以上の結果,マクロファージにおいてNrf2がCD36遺伝子の発現制御領域に直接結合し,その転写を誘導することを明らかにした.

The following information is available this year. 1.Nrf2 gene is used to form an intranuclear complex. The results are as follows: Nrf2 to form an intranuclear complex, FLAG fusion, Nrf2 fusion, anti-FLAG antibody, anti-DNA antibody. Now, please tell me that you are in the middle of the LC/MS decision. 2. In the past, acidizing the BRG1-dependent components of the Nrf2-dependent substrates has been shown to cause significant errors, while the BRG1HO-1 sub-components have shown that the selected ones are not valid. The selected mechanism is responsible for the detection of the data, the siRNA is responsible for the BRG1 suppression, and the sub-system is used to control the domain Nrf2 combined with the ChIP analysis. The results show that HO-1 controls the field-specific Nrf2 combined with low-performance data. The results show that the combination of BRG1, Nrf2 and DNA results shows that there are significant differences between the two methods. 3. On the basis of the analysis of the formation mechanism of Z-DNA and Nrf2 dependence, the BRG1 system is based on the information on the left side of the DNA system, the Z-DNA system, the data structure and the information level. We need to make sure that the field Z-DNA is configured to form a configuration, that is, the configuration of the Z-DNA, the formation of the intracellular Z-DNA, the formation of the Z-DNA, the fusion of the EGFP, the fusion of the components, the combination of the two, the combination of the two components, the fusion of the two components, the integration of the two components, and the combination of the two components. At present, HO-1 is now in control of the formation of Z-DNA in the field. 4. This paper reports the analysis of the mechanism that the CD36 fatty acid acidifies the CD36 acceptor. The reason for this is that the Nrf2 has caused a lot of damage, and that the Nrf2 activation has caused the CD36 to disappear. The control machine will inform you that the error is not correct. I will tell you how to make a decision on the first day of CD36. In order to control the field information system, the Nrf2 system is combined with the ARE configuration system to produce the information. The Nrf2-dependent CD36 child will see that the necessary ARE configuration determines the required ARE configuration. As a result of the above results, it is necessary to make a direct combination of the Nrf2 system and the CD36 system, and to write the guidance system.