マウス胚発生における最初の分化過程で発現される遺伝子の解析

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1.約2,000個のマウス胚盤胞からpoly(A)+RNAを抽出し、ガブラーとホフマンの変法により二本鎖cDNAを合成し、λgt10ベクターを用いて、約48,000のindependentクローンより成るcDNAライブラリーを作成した。2.既に得ている8細胞期cDNAライブラリー及び胚盤胞cDNAライブラリーを用いて、differential hybridization法により、発生段階特異的cDNAをクローニングした。3.中後期胚及び生体マウス臓器からRNAを抽出し、ノーザンハイブリダイゼイションを行ったところ、8細胞期cDNAライブラリーから得られたクローンのうち1個(MO25)は、発生段階特異的、組織特異的発現をする遺伝子由来であることがわかった。他のcDNAクローンの大部分は、B2反復配列を含むものと、ミトコンドリアDNA由来のものであった。4.MO25の塩基配列を決定し、マイクロVAX-IIを用いてホモロジー検索を行った結果、既知の遺伝子でホモロジーを有するものは見出されなかった。5.最初に得られたMO25cDNAクローンは約250塩基対で、ノーザンブロットのバンドは約3.5kbであったため、より長いcDNAクローンの単離を試みた。その結果、1.4kbのcDNAクローンが得られたため、塩基配列を決定したところ、オープンリーディングクレームと思われる配列が存在していた。そのアミノ酸配列は既知のタンパク質とホモロジーは無かったが、リーダー配列らしい領域が存在していたため小胞対内あるいは、細胞外で機能する可能性が示唆された。現在、MO25の初期胚での発現様式を調べるとともに、完全長いcDNAクローンの単離を試みている。