転写伸長因子エロンガンの細胞増殖制御機能の解析

转录延伸因子elongan的细胞生长调控功能分析

• 批准号: 15023243
• 负责人: 麻生 悌二郎
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15023243/
• 关键词: エロンガン; 転写伸長; ES細胞; VHL癌抑制遺伝子; ジーンターゲティング; 散発性腎癌; RNAポリメラーゼII; 分化

1.エロンガンAの機能と細胞の増殖および分化との関連について明らかにするために、エロンガンA遺伝子を欠失したES細胞とマウスとを作製した。ヘテロ欠失型ES細胞は野生型と差を認めないが、ホモ欠失型では細胞増殖速度が約1/3に低下し、細胞サイズの増大と多倍数体の増加という細胞分裂の遅滞に類似した表現型を示すことが判明した。次いで、野生型とホモ欠失型のES細胞間で遺伝子発現プロファイルを比較したところ、欠失により発現が低下した遺伝子には、collagen IV-α1およびα2、laminin B1-subunit 1、等の原始内胚葉の分化マーカーが含まれ、一方、発現の増加した遺伝子には、Rex-1、Oct3/4、等のES細胞の未分化マーカーが認められ、エロンガンAがES細胞の未分化性の保持に関与している可能性が示唆された。また、遺伝子改変マウスについては、ヘテロ欠失型は野生型と明らかな差を認めないが、ホモ欠失型は胎生10.5日頃に低形成のために致死となることが明らかとなった。2.Elongin AのN末端の配列は試験管内転写反応には不要であるが、転写伸長因子SIIや転写共役因子CRSP70のN末端配列との相同性から、in vivoの転写制御における役割が推測されてきた。今回、このN末端配列と結合する蛋白をTwo-hybrid screening法により探索し、Exonucleaseと相同な配列をC末端に有する新規の分子EloA-BP1を単離した。EloA-BP1はエロンガンAと同様に汎組織性の発現を示し、両者が細胞核内で共局在することが判明した。試験管内転写伸長アッセイの結果、EloA-BP1はエロンガンAやRNAポリメラーゼIIの転写伸長活性には影響を与えないことが判明したが、伸長段階における転写産物の校正機能に関わっている可能性がある。

1. The function of A and the relationship between proliferation and differentiation of ES cells The phenotype of ES cells with defective genotype was identified by comparing the wild-type with the non-defective ES cells. The growth rate of ES cells was about 1/3 of that of the wild-type. The growth rate of ES cells was about 1/3 of that of ES cells with defective genotype. The growth rate of ES cells was about 1/3 of that of ES cells with defective genotype. The growth rate of ES cells was about 1/3 of that of ES cells with defective genotype. The growth rate of ES cells with defective genotype was about 1/3 of that of ES cells with defective genotype. The growth rate of ES cells with defective genotype was about 1/3 of that of ES cells with defective genotype. In addition, wild-type and deficient ES cells have been found to have low levels of gene expression, collagen IV-α1-α2, laminin B1-subunit 1, and undifferentiated ES cells with high levels of gene expression, Rex-1, Oct3/4, and so on. The relationship between the undifferentiated nature of ES cells and the possibility of differentiation is also discussed. The birth rate of the wild-type is 10.5 days, and the formation rate of the wild-type is 10.5 days. 2. Elongin A's N-terminal alignment is tested in vivo, and the elongation factor SII and the common service factor CRSP70 are tested in vivo. Now, the N-terminal alignment and binding of proteins are explored by Two-hybrid screening method, and the new molecule EloA-BP1 is isolated from the same alignment and C-terminal alignment. EloA-BP1 is A protein that is expressed in the same way as a protein in the nucleus. As A result of the test, the EloA-BP1 reverse transcription activity of the RNA complex II is affected by the reverse transcription activity of the RNA complex II, and the possibility of correcting the transcription activity of the RNA complex II is determined.

项目成果

Tamura, K: "Identification of EloA-BP1, a novel Elongin A binding protein with an exonuclease homology domain."Biochem.Biophys.Res.Comm.. 309. 189-195 (2003)

Tamura, K：“EloA-BP1 的鉴定，一种具有核酸外切酶同源结构域的新型 Elongin A 结合蛋白。”Biochem.Biophys.Res.Comm.. 309. 189-195 (2003)

Yamazaki, K.: "Mammalian Elongin A is not essential for cell viability but is required for proper cell cycle progression with limited alteration of gene expression."J.Biol.Chem.. 277. 13585-13589 (2003)

Yamazaki, K.：“哺乳动物延长蛋白 A 对于细胞活力不是必需的，但对于适当的细胞周期进展和有限的基因表达改变是必需的。”J.Biol.Chem.. 277. 13585-13589 (2003)

田村 賢司: "臨床検査"医学書院. 9 (2004)

田村贤二：《临床检查》医学书院 9 (2004)。