Bax様分子を介したカスパーゼ非依存的細胞死機構の遺伝学的解析

Bax样分子介导的caspase非依赖性细胞死亡机制的遗传分析

• 批准号: 15024266
• 负责人: 三浦 正幸
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024266/
• 关键词: Bcl-2; Bax; Drob-1; カスパーゼ; アポトーシス; ショウジョウバエ; 遺伝子; スクリーニング

染色体欠損系統を用いたDrob-1の過剰発現によるrough eye表現型を増悪あるいは改善するドミナントモデイファイアースクリーニングによってDrob-1によるrough eye表現型をほぼ完全に回復させる遺伝子領域を同定している。この遺伝子領域には18個の遺伝子の存在が予測され、それぞれの遺伝子に関してinverted repeat cDNAを基本にした発現ベクターを構築した。ショウジョウバエ培養細胞S2に、構築したinverted repeat cDNA発現ベクターを導入・発現させS2に内在性の遺伝子をノックダウンし、Drob-1による細胞死が抑制されるかを指標にしたアッセイを全ての予想される遺伝子について行った。しかしDrob-1細胞死に影響のある遺伝子の同定には至らなかった。複眼とS2細胞ではDrob-1のエフェクター分子が異なる可能生もあるため、現在は複眼でそれぞれの遺伝子に対するinverted repeat cDNAを発現するトランスジェニックショウジョウバエを用いた実験系でのスクリーニングを進めている。遺伝子の機能欠損の影響を指標にして行う上記のドミナントモデイファイアースクリーニングに加え、申請者は遺伝子の機能獲得型スクリーニングも同時に進めた。異所発現スクリーニング法を用いて、ショウジョウバエ複眼に未知遺伝子群を強制発現させることにより、Drob-1発現による複眼の表現型を変化させる系統の同定を試みている。申請者はこの方法をショウジョウバエ全ゲノムに展開する事を目標に進めているが現在5000系統のスクリーニングが終了し、Drob-1による複眼の表現型を軽減する系統を1つ同定した。

Chromosome owe を damage system with い た の Drob - 1 before turning 発 now に よ る rough eye phenotype を raised 悪 あ る い は improve す る ド ミ ナ ン ト モ デ イ フ ァ イ ア ー ス ク リ ー ニ ン グ に よ っ て Drob - 1 に よ る rough eye phenotype を ほ ぼ completely に reply さ せ る heritage 伝 sub-fields を be し て い る. こ の heritage 伝 sub-fields に は 18 の heritage 伝 son の is が be さ れ, そ れ ぞ れ の posthumous son 伝 に masato し て inverted repeat cDNA を basic に し た 発 now ベ ク タ ー を build し た. Youdaoplaceholder0 culture cells S2に and construct the た た chun repeat CDNA 発 now ベ ク タ ー を import · 発 now さ せ S2 に internality の posthumous son 伝 を ノ ッ ク ダ ウ ン し, Drob - 1 に よ る cell death が inhibit さ れ る か を index に し た ア ッ セ イ を full て の to think さ れ る heritage 伝 son に つ い て line っ た. <s:1> the death of Drob-1 cells に affects the ある of the 伝 offspring 伝 to に に to らな らな った った. Compound eye と S2 cells で は Drob - 1 の エ フ ェ ク タ ー molecular が different な る may be born も あ る た め, now は compound eye で そ れ ぞ れ の heritage 伝 son に す seaborne る inverted repeat cDNA を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ を with い た be 験 department で の ス ク リ ー ニ ン グ を into め て い る. Heritage 伝 son owe の function loss の influence を index に し て line う written の ド ミ ナ ン ト モ デ イ フ ァ イ ア ー ス ク リ ー ニ ン グ に え, applicants は heritage 伝 son の type function get ス ク リ ー ニ ン グ も に into at the same time め た. 発 now by different ス ク リ ー ニ ン を グ method with い て, シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ compound eye に unknown legacy 伝 subgroup を forced 発 now さ せ る こ と に よ り, 1 発 Drob - now に よ る compound eye の phenotype を variations change さ せ の る system with fixed を try み て い る. Applicants は こ の way を シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ full ゲ ノ ム に expand す を target に る things into め て い る が now 5000 system の ス ク リ ー ニ ン グ が し, Drob - the end of 1 に よ る compound eye の phenotype を 軽 minus す を 1 つ る system with fixed し た.

项目成果

Inoue, H., Tsukita, K., Iwasato, T., Suzuki, Y., Tomioka, M., Tateno, M., Nagao, M., Kawata, A., Saido, TC, Miura, M., Itohara, S., Takahashi, R.: "The crucial role of caspase-9 in the disease progression of a transgenic ALS mouse model"EMBO J.. 22. 6665-

井上 H.、月田 K.、岩里 T.、铃木 Y.、富冈 M.、馆野 M.、长尾 M.、川田 A.、斋藤 TC、三浦 M.、糸原

Takahashi, M., Kanuka, H., Fujiwara, H., Koyama, A., Hasegawa, M., Miura, M., Iwatsubo, T: "Phosphorylation of aipha-synuclein characteristic of synucleinopathy lesions is recap itulated in alpha-synuclein transgenic Drosophila."Neurosci Lett.. 336. 155-1

Takahashi, M.、Kanuka, H.、Fujiwara, H.、Koyama, A.、Hasekawa, M.、Miura, M.、Iwatsubo, T：“突触核蛋白病病变特征的 aipha-突触核蛋白磷酸化在 α- 中进行了概括。

Furuya, T., Hayakawa, H., Yamada, M., Yoshimi, K., Hisahara, S., Miura, M., Yoshikuni Mizuno, Y., Mochizuki, H: "Caspase-11 mediates inflammatory dopaminergic cell death in the 1-Methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-Tetrahydropyridine mouse model of Parkinson's discas

Furuya, T.、Hayakawa, H.、Yamada, M.、Yoshimi, K.、Hisahara, S.、Miura, M.、Yoshikuni Mizuno, Y.、Mochizuki, H：“Caspase-11 介导炎症性多巴胺能细胞死亡

Kanuka, H., Kuranaga, B., Hiratou, T., Igaki, T., Nelson, B., Okano, H., Miura, M.: "Cytosol-ER interplay by Sec61a translocon in polyglutamine-mediated neurotoxicity in Drosophila."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 100. 11723-11728 (2003)

Kanuka, H.、Kuranaga, B.、Hiratou, T.、Igaki, T.、Nelson, B.、Okano, H.、Miura, M.：“Sec61a 易位子在果蝇多谷氨酰胺介导的神经毒性中的细胞溶胶-ER 相互作用

Iwawaki, T., Akai, R., Kohno, K, Miura, M.: "A transgenic mouse model for monitoring endoplasmic reticulum stress."Nature Medicine. 10. 98-102 (2004)

Iwawaki, T.、Akai, R.、Kohno, K、Miura, M.：“用于监测内质网应激的转基因小鼠模型。”《自然医学》。