DNA-PK、ATMの転写調節解析とその結果を利用した放射線感受性制御・予測

DNA-PK和ATM的转录调控分析以及利用结果的放射敏感性控制和预测

• 批准号: 15025221
• 负责人: 細井 義夫
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025221/
• 关键词: 放射線; DNA修復; 癌

放射線によりDNAには様々な損傷が生じるが、付着細胞の生死(増殖死)を決定するのはDNA2本鎖切断であることがわかっている。DNA2本鎖切断は非相同的末端結合機構と相同的組換えにより修復される。ヒトの細胞では主に非相同的末端再結合機構によりDNA2本鎖切断が修復されていることを明らかにした。術前未治療の大腸癌12例を用いて非相同的末端再結合機構の最初のステップであるDNA-PKと転写因子Sp1の蛋白質量を調べた。その結果、Sp1の蛋白質量はKu70、Ku80、DNA-PKcsの蛋白質量/mRNA量との間で相関が認められた。この結果とKu70、Ku80、DNA-PKcsの蛋白質量が互いに相関することから、Sp1によりKu70、Ku80、DNA-PKcsの転写が調節されている可能性が考えられた。そこで、Ku70、Ku80、DNA-PKcsのプローモーター領域にSp1 binding siteが有るかどうかを検討したところ、Ku70、Ku80、DNA-PKcsはプロモータ領域に複数のSp1 binding siteを持つことが明らかになった。そこで、Sp1とSp3がKu70、Ku80、DNA-PKcsの転写調節や放射線感受性に及ぼす影響を検討するために、Sp1とSp3のsenseとdominant negativeの遺伝子をクローニングした。senseのSp1とSp3はpcDNA4/HisMaxを発現ベクターとして用いた。dominant negativeのSp1とSp3は過剰発現すると細胞増殖が停止し、目的としたクローンが得られないことが報告されているので、発現ベクターとしてはGeneSwich systemのpGene/V5-Hisを用いた。PCRにより得られたクローンをベクターに挿入済みで、シークエンスを確認した。Sp1とSp3を過剰発現した場合とdominant negativeのSp1とSp3によりそれらの活性を阻害した場合のDNA-PK蛋白発現に対する影響と放射線感受性に対する影響を検討した。

Radiation に よ り DNA に は others 々 な damage が raw じ る が の, pay the cell death (death) rights colonization を decided す る の は DNA2 this lock cut で あ る こ と が わ か っ て い る. DNA2 locks cut off と non-identical end bonding mechanisms と the same assembly replacement えによ と repair される. ヒ ト の cells で は main に again at the end of the same combination institution に よ り DNA2 this lock cut が repair さ れ て い る こ と を Ming ら か に し た. Preoperative treatment not の を colorectal cancer in 12 cases with い て again at the end of the same combination institution の initially の ス テ ッ プ で あ る DNA - PK と planning write factor Sp1 の protein quality を adjustable べ た. The で correlation between the そ <s:1> results, the protein mass of Sp1 <s:1> <s:1> Ku70, Ku80, and the protein mass /mRNA quantity of DNA-PKcs <s:1> と <e:1> が was identified められた. こ の results と Ku70, Ku80, DNA - PKcs の protein quality が mutual い に phase masato す る こ と か ら, Sp1 に よ り Ku70, Ku80, DNA - PKcs の planning write が adjust さ れ て い る possibility が exam え ら れ た. そ こ で, Ku70, Ku80, DNA - PKcs の プ ロ ー モ ー タ ー field に Sp1 binding site が have る か ど う か を beg し 検 た と こ ろ, Ku70, Ku80, DNA - PKcs は プ ロ モ ー タ field に plural の Sp1 binding siteを holds を とが とが and ら になった になった. そ こ で, Sp1 と Sp3 が Ku70, Ku80, DNA - PKcs の planning write adjust や radiation susceptibility に and ぼ す influence を beg す 検 る た め に, Sp1 と Sp3 の sense と dominant negative の posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ し た. sense Sp1とSp3 <s:1> pcDNA4/HisMaxを is used for ベ タ タ と て て て て. Dominant negative の Sp1 と Sp3 は before turning 発 now す る と が stop し cells raised colonization, purpose と し た ク ロ ー ン が have ら れ な い こ と が report さ れ て い る の で, 発 ベ ク タ ー と し て は GeneSwich system の pGene/V5 - His を い た. PCR に よ り have ら れ た ク ロ ー ン を ベ ク タ ー に scions into 済 み で, シ ー ク エ ン ス を confirm し た. Sp1 と Sp3 を before turning 発 now し た occasions と dominant negative の Sp1 と Sp3 に よ り そ れ ら の active を resistance against し た occasions - PK の DNA protein 発 now に す seaborne る influence と radiation susceptibility に す seaborne る influence を beg し 検 た.

项目成果

Komuro, Y.: "Prediction of tumor radiosensitivity in rectal carcinoma based on p53 and Ku7O expression."J.Exp.Clin.Cancer Res.. 22. 223-228 (2003)

Komuro, Y.：“基于 p53 和 Ku7O 表达预测直肠癌肿瘤放射敏感性。”J.Exp.Clin.Cancer Res.. 22. 223-228 (2003)

Hosoi, Y.: "Suppression of anchorage-independent growth by expression of the ataxia-telangiectasia group D complementing gene, ATDC."Molecular Carcinogenesis. (in press).

Hosoi, Y.：“通过共济失调毛细血管扩张 D 组互补基因 ATDC 的表达来抑制锚定非依赖性生长。”分子癌发生。

Enomoto, A.: "Decreased c-Myc expression involved in X-ray-induced apoptotic cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4."International Journal of Radiation Biology. 79. 589-600 (2003)

Enomoto, A.：“c-Myc 表达降低参与 X 射线诱导的人类 T 细胞白血病细胞系 MOLT-4 的细胞凋亡。”国际放射生物学杂志。

Umeda N.: "Difference in the heat sensitivity of DNA-dependent protein kinase activity among mouse, hamster and human cells."International Journal of Radiation Biology. 79. 671-680 (2003)

Umeda N.：“小鼠、仓鼠和人类细胞之间 DNA 依赖性蛋白激酶活性的热敏感性差异。”国际放射生物学杂志。

Hosoi, Y.: "Suramin sensitizes cells to ionizing radiation by inactivating DNA-dependent protein kinase."Radiation Research. (in press).

Hosoi, Y.：“苏拉明通过灭活 DNA 依赖性蛋白激酶使细胞对电离辐射敏感。”辐射研究。