精細胞細胞質でのmRNAポリ(A)鎖伸長による遺伝子発現制御ネットワークの解析

精子细胞质中 mRNA 聚腺苷酸链延长分析基因表达控制网络

基本信息

  • 批准号:
    15030203
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.1万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

哺乳動物精巣に特異的なポリ(A)ポリメラーゼTPAPの欠損マウスでは,精子核や鞭毛などの形態形成にかかわる遺伝子の転写量が著しく低下しており,結果として精子形成が球状精細胞の段階で停止する。今年度は,昨年度に引き続きTPAP欠損による精子形成不全の分子基盤について検討した。(1)TPAPによるmRNAポリ(A)鎖伸長機構の解析…TPAPはパキテン期精母細胞から存在するが,特定mRNAに対するポリ(A)鎖伸長は球状精細胞特異的である。そのmRNA特異性や時期特異性を決定する機構について検討した。標的mRNAであるTRF2とTFIIAγの3'-非翻訳領域(UTR)を用いたEMSA法による競争阻害実験により,同一の因子が結合していると考えられた。TFIIAγとTRF2の3'-UTR中にはそれぞれ3つと1つのcytoplasmic polyadenylation element(CPE, UUUUU/AAU)が存在し,その結合タンパク質CPEB1には3つのパラログが存在する。CPEB2が精巣において高発現していることから,CPEB2がポリ(A)鎖伸長に関与していることが推測された。(2)精巣におけるTAF10の核移行機構の解析…抗TAF10抗体を用いた精巣抽出液の免疫沈降により,神経細胞形成に関わるモータータンパク質KIF2AのスプライシングバリアントであるKIF2βとKIF2γが共免疫沈降されたが,GST-pull downアッセイの結果,両者は直接相互作用しているのではないことが判明した。また,RT-PCRと免疫沈降によりスプライシングバリアントのうち,KIF2γのみが精巣においてTAF10の細胞内輸送に関わっていることが判明した。今後,両者を仲介するタンパク質を探索する予定である。(3)TPAP欠損マウスのプロテオーム解析…TPAP欠損マウスの球状精細胞では,TAF10以外にも影響を受けているタンパク質が存在する可能性がある。そこで,野生型とTPAP欠損マウスの精巣タンパク質を二次元電気泳動により比較したところ,TPAP欠損マウスの球状精細胞ではSorbitol dehydrogenaseとAdenylate kinaseが減少していた。事実,TPAP欠損マウスの球状精細胞ではこれらmRNAのポリ(A)鎖伸長が不完全であった。これらのことから,いくつかのmRNAの球状精細胞における正常な翻訳にはポリ(A)鎖の伸長が不可欠であることが示唆された。
The TPAP of lactation animal sperm is abnormal. The flagellum of the sperm nucleus forms the flagellum of the sperm nucleus. The shape of the flagellum of the sperm nucleus forms the flagellum of the sperm nucleus. The number of sperm cells is low. This year, last year, we introduced TPAP deficiency syndrome, spermatozoa incomplete spermatozoa, molecular base, molecular DNA, and so on. (1) the analysis of the TPAP growth mechanism for mRNA growth (A). During the period of TPAP pregnancy, there is a cycle in the spermatocyte of the spermatozoa, which is specific to the elongation of the globular seminal cell in the specific mRNA cycle. The special time period of the mRNA decides that the organization of the organization will make a special decision on its operation. The mRNA, TRF2, TFIIA gamma ray 3'- non-translatable domain (UTR) methods were used to determine the effect of the same factor, and the same factor was combined with each other. The presence of cytoplasmic polyadenylation element (CPE, UUUUU/AAU) in TFIIA γ-TRF2 3'-UTR is sensitive to the presence of cytoplasmic polyadenylation element (CPE, UUUUU/AAU) in combination with the presence of CPEB1. The CPEB2 system is in good condition, and the CPEB2 system (A) is responsible for improving the performance of the system. (2) to analyze and analyze the nuclear transfer mechanism of TAF10. The anti-TAF10 antibody was immunized with the extract of spermatozoa and immunized with anti-KIF2 antibody. The anti-KIF2 antibody was co-immunized with KIF2 β-KIF2 γ. The results of the results showed that the cells directly interacted with each other, and the results showed that they directly interacted with each other. RT-PCR, immunoprecipitation, immunoprecipitation, antiretroviral therapy, KIF2, gamma-ray, sperm, TAF10, intracellular delivery, immunoglobulin, and immunoglobulin were detected. From now on, we will make an intermediary to explore what we are supposed to do. (3) the analysis of TPAP is not available. TPAP is not responsible for the presence of globular sperm cells, and there is a possibility that TAF10 will be affected. The TPAP of the wild type was less sensitive than that of the TPAP, while that of the TPAP was less than that of the globular spermatid cell. As a matter of fact, TPAP is not responsible for the growth of globular spermatozoa and mRNA cells. The elongation is not complete. If you want to mRNA the globular seminal cell, you can't overturn it normally. (a) the elongation should not be in arrears.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Zhuang, T., Kashiwabara, S., Noguchi, J., Baba, T.: "Transgenic expression of testis-specific poly(A) polymerase TPAP in wild-type and TPAP-deficient mice"Journal of Reproduction and Development. (in press). (2004)
Zhuang, T.、Kashiwabara, S.、Noguchi, J.、Baba, T.:“野生型和 TPAP 缺陷小鼠中睾丸特异性多聚腺苷酸聚合酶 TPAP 的转基因表达”生殖与发育杂志。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Synthesis, processing, and subcellular localization of mouse ADAM3 during spermatogenesis and epididymal sperm transport
Co-localization of Trax and Mea2 in Golgi complex of pachytene spermatocytes in the mouse
Trax 和 Mea2 在小鼠粗线期精母细胞高尔基复合体中的共定位
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Matsuda;M.;Kondo;M.;Kashiwabara;S.;Yoshihara;M.;Sutou;S.;Matsukuma;S.
  • 通讯作者:
    S.
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  • 通讯作者:
    柏原 真一

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