重金属コバルトをターゲティングするタンパク質の分子認識機構の解明と応用

重金属钴蛋白分子识别机制阐明及应用

• 批准号: 12019205
• 负责人: 小林 達彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019205/
• 关键词: コバルト; 重金属; トランスポーター; Rhodococcus

1)コバルトトランスポーター遺伝子とニトリルヒドラターゼ遺伝子を共発現させたRhodococcus rhodochrous ATCC12674形質転換体を、コバルト濃度を0.08,0.4,1mMと各々変えた培地で培養した結果、各々、25.6,20.6,21.4%の回収率でコバルトが菌体内に蓄積回収された。2)8回膜貫通型のコバルトトランスポーターと(Alcaligenes eutrophus由来の)ニッケルトランスポーターの各トランスメンブレンドメイン領域を入れ替えたキメラを3種作成し、^<57>Co取り込み活性を測定した結果、C末端側のトランスメンブレンドメイン領域よりもむしろN末端側のトランスメンブレンドメイン領域がコバルト輸送に重要であることが示唆された。また、部位特異的変異法実験の結果、第1トランスメンブレンドメイン領域中のHis34をIleに変えた変異体(His34I)は^<57>Co取り込み活性が50分の1に減じ、また、第2トランスメンブレンドメイン領域中のHis74をIleに変えた変異体(His74I)も同様の活性減少を示し、両His残基はコバルト輸送に重要な役割を演じていることが強く示唆された。

1) Rhodococcus rhodochrous ATCC12674 was cultured at concentrations of 0.08, 0.4, and 1 mM, and the recovery rates were 25.6, 20.6, and 21.4%, respectively. 2)8-loop membrane penetration type of the three types of the three types of <57>the The results of site-specific variation method showed that His34 Ile variant (His34I) in the first domain decreased activity <57>by 50 points, His74 Ile variant (His74I) in the second domain decreased activity, and His residues were important for transport.

项目成果

Kobayashi,M.& Shimizu,S.: "Nitrile hydrolases"Current Opinion in Chemical Biology. 4. 95-102 (2000)

小林，M.