制がん剤耐性機構とその克服

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本年度の研究計画に対応し以下の実績を得た.1.耐性癌に対するモノクローナル抗体MRKー16, 17, 18, 20の抗原の同定と精製. MRKー16, 17の認識する抗原はPーglycoproteinである. Pーglycoproteinは抗体を用いたimmunoaffinity chromatographyで精製に成功した. その結果, PーglycoproteinはATPase活性をもつことが明らかとなった. 抗癌剤膜輸送にATPの関与が考えられ興味深い. MRKー18, 20の認識する抗原はそれぞれ分子量8.5万, 30万の膜タンパク質である. そのいずれの機能も現在不明である.2.Pーglycoproteinのリン酸化反応. Pーglycoproteinはbasalにもリン酸化された膜タンパクである. そのリン酸化はカルシウム拮抗薬, カルモジュリン阻害剤によって亢進する. またホルボルエステルであるPMAによって特に顕著にリン酸化が亢進した. ペプタイドを分析すると, 前二者によるリン酸化部位と, PMAによるリン酸化の部位は異る. PMAによるリン酸化にはCーkinaseが関与することが考えられる. Cーkinaseによるリン酸化はPーglycoproteinの機能, 例えば抗癌剤の膜輸送や耐性細胞の増殖, に関与する可能性が考えられ, 現在解析中である.3.耐性遺伝子のクローニング. アドリアマイシン耐性のK562細胞のDNAをマウスLー細胞にトランスフェクトし, トランスフェクタントよりMDAを分離, 制限酵素で切断後, ヒト特異的配列Aluでひろいあげることで, 耐性遺伝子断片λKa2.6のクローニングに成功した. λKa2.6は各種ヒト耐性細胞に増幅して存在する. またその認識するmRNAは4.5kbであり, そのcDNAの塩基配列からPーglycoprotein の遺伝子であることが明らかとなった.