制がん剤耐性機構とその克服

点击翻译按钮获取中文摘要

本年度の研究計画に対応し以下の実績をえた。1.耐性細胞の樹立と、耐性細胞の生化学的薬現学的解析。ヒト骨髄性白血病細胞K562を連続的にビンクリスチン、あるいはアドリアマイシンにさらすことによって、ビンクリスチン、アドリアマイシンに耐性化した株(それぞれK562/VCR,K562/ADM)を樹立した。耐性株は染色体が変化している。生化学的な耐性機構として、抗癌剤排出の亢進がみられた。また膜に18万,8.5万,6.5万の糖タンパク(耐性タンパク)を発現していた。2.耐性タンパクに対するモノクローナル抗体の作成。マウスをK562/ADMで免疫し、脾臓細胞をミエローマと融合させた細胞株から、耐性癌に選択的に反応するモノクローナル抗体を得た。これらの抗体のうちMRK-16と17は、K562/ADMのみならず、ヒト卵巣癌細胞のアドリアマイシン耐性株にも反応した。MRK-16,17は抗原として、分子量18万の耐性糖タンパク(P-glycoprotein)を認識する。3.モノクローナル抗体を用いた耐性タンパクの機能解明。P-glycoproteinに反応する抗体MRK-16は耐性癌細胞において、抗癌剤の膜輸送を修飾する。またMRK-17は単独で耐性細胞の増殖を阻害した。このことは耐性タンパクP-glycoproteinは抗癌剤の膜輸送、あるいは細胞の増殖に関与することを示す。4.耐性遺伝子の分離。K562/ADMのDNAをマウスのL-細胞にトランスフェクトすることによって、耐性を獲得したL-細胞の分離に成功した。更に2次トランスフェクタントの分離に成功した。現在、2に関しては他のモノクローナル抗体の作成、3に関してはP-glycoprotein及び他のタンパクの機能を解析中であり、4に関してはトランスフェクタントから耐性遺伝子をクローニングしている。