Identifizierung/Klonierung des Humanen Foamy Virus (HFV) Rezeptors und Struktur/Funktionsanalyse des HFV Envelope Proteins

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Foamyviren (FV) bilden eine eigene Gruppe in der Klasse derRetroviren. Ihre Replikationsstrategie weißt jedoch für Retroviren einzigartige Eigenschaften auf und hat Ähnlichkeiten zu der der Hepadnaviren. Diese sowie der gutartige Charakter der natürlichen FV-Infektionen und der breite Tropismus von FV gaben Anlaß zur Entwicklung von FV Vektoren für die Gentherapie. Allerdings ist über die ersten Schritte des FV Replikationszyklus, die Bindung an den bisher unbekannten Rezeptor und die Freisetzung des viralen Kapsids in das Innere der Wirtszelle wenig bekannt.Mit Hilfe eines retroviralen Gene-Trap Ansatzes wollen wir durch eine Inaktivierungsstrategie den weit verbreiteten FV Rezeptor identifizieren und klonieren. Von uns entwickelte Expressionssysteme für rekombinante, hochtitrige, molekular definierte, infektöse FV oder replikations-defiziente FV Vektoren sowie mit FV Env pseudotypisierten Murine Leukämie Virus (MuLV) Vektoren sollen benutzt werden, um die Interaktion des FV Hüllproteins mit dem zellulären Rezeptor zuanalysieren.Durch Verwendung eines Hefe Two-Hybrid Systems, mit demProtein-Protein Wechselwirkungen analysiert werden können, soll die Interaktion der intrazellulären FV Env Domänen mit anderen FV Strukturproteinen charakterisiert, sowie für die FV Replikation essentielle zelluläre Interaktionspartner identifiziert werden. Die Analyse verschiedener FV Env Mutanten soll Aufschluß über dessen Rolle in der Regulation desintrazellulären FV Replikationszyklus geben. Für eine weitergehende Struktur- und Funktionsanalyse der FV Env Subdomänen sollen verschiedene monoklonale Antikörper hergestellt werden.