単クローン抗体を用いたヒト造血器腫瘍細胞関連抗原の染色体支配と遺伝子支配の検索

使用单克隆抗体寻找人类造血肿瘤细胞相关抗原的染色体和遗传控制

• 批准号: 60015114
• 负责人: 上田 龍三
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60015114/
• 关键词: 白血病; リンパ腫; モノクローナル抗体; 染色体支配; 遺伝子支配; 体細胞雑種形成法; トランスフェクション

本研究グループが作製した白血病・リンパ腫関連モノクローナル抗体を用い、その対応抗原の染色体支配及び遺伝子支配の解析を行った。染色体支配の解析は、ヒト末梢血リンパ球のConAブラストとマウスBW5147株細胞とを用いた体細胞雑種形成法により、現在までに汎T抗原の一種でT細胞性白血病・リンパ腫の分化段階を規定するに重要な抗原であるTp120抗原(CD6,gp120)及びTp40抗原(CD7,gp40)の支配遺伝子がそれぞれヒト染色体の11番及び17番上に存在することを(【i】)染色体分析、(【ii】)Lactate dehydrogenase A(第11番染色体)、Galactokinase(第17番染色体)のアイソザイム解析、(【iii】)フローサイトメトリーによる抗原発現の分析及び(【iv】)免疫沈降法による抗原分子の同定により明らかにした。但し、リンパ性白血病関連抗原であるNL-1(CD10,gp100),NL-22,HL-47抗原遺伝子の検索は、これら抗原陽性白血病細胞とマウスNS-1細胞との雑種細胞形成により実験を行ったが、一過性の陽性融合細胞を認めたのみで染色体の同定には到っていない。遺伝子支配の研究の第1歩として、HPB-ALLの高分子DNAを用いて行った遺伝子移入(transtection)において、汎T抗原であるTp40並びにHLAclass【I】抗原を同時発現するトランスフェクタントの樹立に成功した。第3次トランスフェクタントの樹立にも成功したが、Tp40抗原のみ陽性でHLA class【I】抗原は陰性となった。本細胞より高分子DNAを抽出し制限酵素Sau3Aにて切断後、λEMBL-3に挿入し、遺伝子ライブラリーを作製した。Alu配列(Blur8)をプローブとしたプラークハイブリダイゼーションの結果、1個の陽性プラークを得た。このファージ0-2(13kb)の制限酵素地図を作製し、Alu配列の存在するフラグメントを同定した。しかしながら、ファージ0-2によるトランスフェクションではTp40抗原陽性クローンは得られておらず、本DNAとTp40抗原支配遺伝子の関連は明らかでない。

This study was conducted to investigate the role of anti-leukemia antibodies in the prevention and treatment of leukemia, and to analyze the chromosomal and genetic dominance of anti-leukemia antigens. Chromosome control analysis of peripheral blood cells in BW5147 cells using somatic cell seeding method, and now a pan-T antigen Tp120 antigen (CD6, gp120) and Tp40 antigens (CD7, gp40) dominant gene is present on chromosome 11 and 17.(i) chromosome analysis,(ii)Lactate dehydrogenase A(chromosome 11), Galactokinase(chromosome 17),(iii) Analysis of antigen expression and (iv) Identification of antigen molecules by immunosedimentation However, the detection of NL-1(CD10, gp100),NL-22,HL-47 antigens in leukemia-associated antigens and their expression in antigen-positive leukemic cells and NS-1 cells and seed cell formation were also investigated. The first step in the study of gene regulation is to successfully establish a gene transfer system for HPB-ALL using high molecular DNA. The third time, Tp40 antigen was positive and HLA class I antigen was negative. The cells were isolated from DNA and restricted by enzyme Sau3A. After cleavage, λEMBL-3 was inserted into the cells, and the DNA fragments were controlled. Alu configuration (Blur8) results, 1 positive selection The restriction enzyme site of this fragment 0-2(13kb) is controlled and the presence of Alu alignment is determined simultaneously. Tp40 antigen-positive gene was detected in the DNA and Tp40 antigen-dominated gene.

项目成果

Cancer Res.45. (1985)

癌症研究 45。

J. Immunol.134. (1985)

J.免疫学杂志134。

Somat.Cell Mol.Genet.11. (1985)

体细胞分子遗传学11。