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インスリン様増殖因子の細胞内シグナルとシグナル調節制御機構の解析

胰岛素样生长因子细胞内信号及信号调控机制分析

基本信息

批准号：
01614507
负责人：
尾形悦郎
金额：
$ 4.48万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は哺乳類線維芽細胞株において、インスリン様増殖因子2型(IGF-II)が細胞周期依存性に増殖シグナルとして働くこと、さらにこのシグナルはIGF-II受容体(IGF-IIR)から百日咳毒素(IAP)感受性GTP結合(G)蛋白を介して伝えられることを発表した。本年度は1.IGF-IIRのシグナル伝達能をin vitroで測定するために、破砕細胞膜を用いた天然の系と人工リン脂質膜に精製蛋白のみを再構成する完全再構成系の2系を作成した。我々は、この2つの系でIGF-IIRが選択的にGi-2と共役することを証明した。これは、IGF-IIRがシグナル伝達能を有することを示すとともに、一回膜貫通受容体がG蛋白と共役することを直接証明した最初の例である。2.in vivoでのIGF-IIRシグナル解析系を用いて、静止期細胞でIGF-IIシグナルが伝わらない理由を明らかにした。これは(1)IGF-IIの細胞への結合の検討と、抗Gi-2 α抗体を用いてGi-2の定量をした結果、細胞周期の変化に伴うIGF-IIRとGi-2の量的変化は認められなかった。またPDGFとEGFを処理した細胞では、IGF-IIがGi-2の活性化を惹起したが、静止期細胞ではGi-2の活性化は見られなかった。これらのことから静止期細胞では、IGF-IIRとGi-2との間に脱共役が共存するためにIGF-IIシグナルが伝わらないことが明らかとなった。(2)PDGFとEGFの処理、あるいは細胞周期の進行が、静止期細胞でのIGF-IIR/Gi-2の脱共役をいかにして共役可能状態に変えるかを検討した。温度感受性ras移入細胞の静止状態では、IGF-IIはGi-2の活性化を起こさなかったが、40℃から37℃への温度変換により活性化を惹起した。この結果からras蛋白の活性化が静止期細胞でのIGF-IIR/Gi-2の脱共役を共役可能状態に変える働きをすることがわかった。これは、受容体とG蛋白との共役が細胞周期によって制御されるという点で画期的である。

In mammalian cell lines, IGF-II is a cell cycle dependent growth factor, and IGF-IIR is a pertussis toxin (IAP) responsive GTP-binding protein. This year, the IGF-IIR system was developed to measure the performance in vitro, to break down cell membranes, to use natural systems, to use artificial lipid membranes, to refine proteins, and to reconstruct complete systems. We prove that the IGF-IIR system is a Gi-2 system. The IGF-IIR is a direct demonstration of the presence of G-protein in the membrane. 2.in These are: (1) The study of IGF-II cellular binding, the quantitative results of Gi-2 using anti-Gi-2 α antibodies, and the changes in cell cycle associated with IGF-IIR and Gi-2 quantitative changes. The activation of Gi-2 in cells treated with PDGF and in quiescent cells The IGF-IIR and Gi-2 cells in the quiescent phase were isolated from each other. (2) PDGF and EGF treatment, cell cycle progression, quiescent phase IGF-IIR/Gi-2 and co-active state. Temperature sensitive ras were transferred into resting cells, and IGF-II activated Gi-2 at temperatures ranging from 40 ℃ to 37 ℃As a result, the activation of ras protein in quiescent cells and the deactivation of IGF-IIR/Gi-2 in co-active cells were reduced. The receptor and G protein co-operate to control the cell cycle.