転写因子のin vivo結合配列クローン化による標的遺伝子同定法の開発

通过转录因子体内结合序列克隆开发靶基因鉴定方法

• 批准号: 08283215
• 负责人: 高橋 直樹
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08283215/
• 关键词: 転写因子; 標的遺伝子; ホメオボックス; クロマチン; ゲノム研究

我々はこれまでにマウスホメオボックス遺伝子を用いて、転写因子のin vivo結合配列をマウス胎児クロマチンより精製クローン化し、その近傍に存在する標的遺伝子を同定することによって、ホメオボックス遺伝子の発生過程における機能を分子レベルで明らかにしてきた。この方法で最も時間と手間のかかるステップは、クローン化したin vivo結合配列の近傍に存在する標的遺伝子の同定であるが、ヒトや線虫のゲノム計画によってゲノムの全塩基配列が決定されれば、転写因子のin vivo結合配列をクローン化すると同時に標的遺伝子が同定されることになり、研究の速度を何十倍にも速めることが出来る。本研究はこのような研究法を確立することを目指し、マウスで用いた方法が、ヒトや線虫にも応用可能であるかを検討した。ヒトEC細胞NT2/D1はヒト胎児の性質の少なくとも一部は持っており、ホメオボックス(Hox)など発生に関わる遺伝子の発現が報告されている。このEC細胞をレチノイン酸処理し、HoxB1遺伝子の発現を誘導した後、HoxB1のin vivo結合配列の濃縮を行った。濃縮したDNAをベクターに組み込み、ライブラリーを作製した。このライブラリー中にHoxB1の自己遺伝子の発現にかかわると考えられる配列が濃縮されているかどうかを、ハイブリダイゼーションによって調べたが、自己遺伝子の発現調節にかかわる配列の濃縮は検出されなかった。よりゲノムサイズの小さい線虫を用いた標的遺伝子単離法の検討のため、線虫Hox遺伝子lin39、mab5、eg15の遺伝子産物を大腸菌発現ベクターを用いて作製し、これを抗原とした抗体の調製を行った。これらの抗体は特異的にその抗原を認識することを確認した。

The gene expression system is composed of a gene expression system, a gene expression system and a gene expression system. This method is based on the optimal time and time between hand changes and the simultaneous determination of target genes in the vicinity of in vivo binding alignment. The study speed is ten times faster. This study establishes the methodology for the study and discusses the feasibility of the study. Some of the properties of NT-2/D1 cells were reported to be related to their development. After acid treatment of EC cells, induction of HoxB1 gene expression, concentration of HoxB1 in vivo binding and alignment The concentration of DNA is the most important factor in the preparation of DNA. In this paper, the development of HoxB1 gene is studied, and the concentration of HoxB1 gene is determined. The gene products of Hox gene lin39, mab5, eg15 and E. coli development were studied by using the target gene isolation method. The antigen and antibody modulation were also carried out. The antibody is specific to the antigen.

项目成果

高橋直樹: "ハエとマウスの癌抑制遺伝子" Molecular Medieine. 33. 768-773 (1996)

Naoki Takahashi：“果蝇和小鼠中的肿瘤抑制基因”《分子医学》33. 768-773 (1996)。

T.Ito et.al.: "A Serine/Threonine Protein Kinase Gene Isolated by an in vivo Birding Procedute Using the Arabidopsis Floral Homeotie Gene Product,AGAMOUS." Plant and Cell Physiology. (in press). (1997)

T.Ito 等人：“使用拟南芥花同源基因产物 AGAMOUS 通过体内观鸟程序分离出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因。”

H.Shoji et.al.: "Regionalized Expression of the Dbx Family Homeobox Genes in the Embryonic CNS of the Mouse." Mechanisms of Development. 56. 25-39 (1996)

H.Shoji 等人：“Dbx 家族同源盒基因在小鼠胚胎中枢神经系统中的区域化表达”。

高橋直樹: "Hox遺伝子産物による転写調節機構" 蛋白質・核酸・酵素. 41. 1088-1094 (1996)

Naoki Takahashi：“Hox 基因产物的转录调控机制”蛋白质/核酸/酶。41. 1088-1094 (1996)

H.Saegusa et.al.: "Targeted Disruption in the Mouse Hoxc-4 Locus Results in Axial Skeleton Homeosis and Maltormation of the Xiphoid Process." Developmental Biology. 174. 55-64 (1996)

H.Saegusa 等人：“小鼠 Hoxc-4 基因座的靶向破坏导致轴骨同质异位和剑突畸形。”