脳の可塑性のCa結合蛋白質・リン酸化蛋白質への影響の研究

脑可塑性对Ca结合蛋白和磷酸化蛋白影响的研究

• 批准号: 62221007
• 负责人: 野々村 禎昭
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62221007/
• 关键词: 小脳Ca結合蛋白質; 30Kダルトン蛋白質; Caオートラジオグラフィー; 酸性蛋白質

中枢神経系におけるCaの役割は最近注目されている. 特に可塑性との関連についてはCa結合蛋白質, リン酸化蛋白質の存在様式と結びつけられる可能性がある. しかしカルモジエリン(CM), S-100蛋白を除いてはあまり研究が行われていない. 我々はすでに小脳でいわゆるビタミンD依存性Ca結合蛋白質の精製とその一次配列を決定したが, その時30KダルトンのCa結合性蛋白質をCaオートラジオグラフィーで認めたのでその精製にとりくんだ.牛小脳をEGTA存在下低イオン強度下で抽出し, 硫安分画で70%飽和から100%飽和分画をとる. ついて陰イオン交換カラムでCaオートラジオグラフィーを参考にしつつイオン強度で流出させるとCMよりさらに高イオン強度で流出される蛋白質があった. しかしこの分画は多量の核酸を含んでおり, DNAseで分解されず, RNAseで分解されるのでRNAであることがわかった. この後HPLCゲル濾過すると30Kダルトンの蛋白質が精製された. 内在性テロシンのCa依存性を調べると半位置で3×10^<-6>Mであった. さらにいわゆる28KダルトンのビタミンD依存性Ca結合蛋白質と比較すると上記の変化もSDSPAGEの位置, Ca有無による変化, 全てで異っている. 28Kの抗体で免疫転写法で染めても染まらない. さらに塩酸加水分解によるアミノ酸組成を調べてみると, この30K蛋白質はロイシン, グルタミンーグルタミン酸, アスパラギンーアスパラギン酸の異常に多い特殊な酸性Ca結合蛋白質であることがわかった. 現在抗体を作製中であり小脳中の局在決定を行い, さらに部分アミノ酸配列からオリゴヌクレオタイドプローブを作製し, cDNAクローニング, 遺伝子クローニングを行っていく予定である.

The central nervous system is the most recent attention-grabber. The special plasticity is related to the Ca-binding protein.しかしカルモジエリン(CM), S-100 protein is removed and researched. 々はすでに小脳でいわゆるビタゆるビタミンD-dependent Ca-binding protein のrefined とそのprimary arrangement をdetermination したが, その时30KダルトンのCa-binding protein をCaオートラジオグラフィーめThe refined たのでそのにとりくんだ. Beef squid can be extracted in the presence of low イオン strength in the presence of EGTA, Thione is divided into 70% saturated and 100% saturated.ついて音イオン Exchange カラムでCaオートラジオグラフィーを Reference にしつつイオンStrength で flow out させるとCM よりさらに高イオンStrength で flow out されるprotein があった.しかしこのdrawingはa large amount of nucleic acid をcontaining んでおり, DNAse でdegradation されず, RNAse is broken down and RNA is decomposed. After HPLC filtering, 30K protein is purified. Intrinsic テロシンのCadependencyを动べるとhalfpositionで3×10^<-6>Mであった.さらにいわゆる28K ダルトンのビタミンD-dependent Ca-binding protein と comparison すると上记の変化もSDSPAGEの position, whether Ca has been による剉化, All are different. The writing method of 28K antibody is immune. It is dyed and dyed. The さらに塩 acid is hydrolyzed by the によるアミノ acid to form the べてみると, この30K protein はロイシン,グルタミンーグルタミン acid,アスパラギンーアスパラギン草の多いSpecial なAcidic Ca-binding protein であることがわかった. Currently, the antibody is being produced and the antibody is being produced, and the antibody is being produced. cDNAクローニング, 伝子クローニングを行っていく氧ある.

项目成果

H.Kurokawa & Y.Nonomura: Journal of Biochemistry. 103. 8-10 (1988)

黑川