脳の可塑性のCa結合蛋白質・リン酸化蛋白質への影響の研究

脑可塑性对Ca结合蛋白和磷酸化蛋白影响的研究

• 批准号: 62221007
• 负责人: 野々村 禎昭
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62221007/
• 关键词: 小脳Ca結合蛋白質; 30Kダルトン蛋白質; Caオートラジオグラフィー; 酸性蛋白質

中枢神経系におけるCaの役割は最近注目されている. 特に可塑性との関連についてはCa結合蛋白質, リン酸化蛋白質の存在様式と結びつけられる可能性がある. しかしカルモジエリン(CM), S-100蛋白を除いてはあまり研究が行われていない. 我々はすでに小脳でいわゆるビタミンD依存性Ca結合蛋白質の精製とその一次配列を決定したが, その時30KダルトンのCa結合性蛋白質をCaオートラジオグラフィーで認めたのでその精製にとりくんだ.牛小脳をEGTA存在下低イオン強度下で抽出し, 硫安分画で70%飽和から100%飽和分画をとる. ついて陰イオン交換カラムでCaオートラジオグラフィーを参考にしつつイオン強度で流出させるとCMよりさらに高イオン強度で流出される蛋白質があった. しかしこの分画は多量の核酸を含んでおり, DNAseで分解されず, RNAseで分解されるのでRNAであることがわかった. この後HPLCゲル濾過すると30Kダルトンの蛋白質が精製された. 内在性テロシンのCa依存性を調べると半位置で3×10^<-6>Mであった. さらにいわゆる28KダルトンのビタミンD依存性Ca結合蛋白質と比較すると上記の変化もSDSPAGEの位置, Ca有無による変化, 全てで異っている. 28Kの抗体で免疫転写法で染めても染まらない. さらに塩酸加水分解によるアミノ酸組成を調べてみると, この30K蛋白質はロイシン, グルタミンーグルタミン酸, アスパラギンーアスパラギン酸の異常に多い特殊な酸性Ca結合蛋白質であることがわかった. 現在抗体を作製中であり小脳中の局在決定を行い, さらに部分アミノ酸配列からオリゴヌクレオタイドプローブを作製し, cDNAクローニング, 遺伝子クローニングを行っていく予定である.

The central god is in the department of Ca service, which has recently attracted the attention of others. Special plasticity tests show that there is a formula for Ca binding protein and acidified protein. The expression of Smur100 protein (CM) was detected by RT-PCR. We need to determine the number of Ca binding proteins in a single column. At 30K, we need to determine the binding protein of Ca. We need to determine the binding protein of Ca at 30K. Niuxiaodong EGTA has a low temperature, a low strength, a pull-out, a thioampere of 70% and a split of 100%. We need to know that there is a difference between the two parts in terms of Ca, strength, strength and strength. The amount of nucleic acid contains DNAse, DNAse, RNAse, RNA, DNA, etc. After that, HPLC was able to determine the concentration of protein in the solution at 30K. Internal dependence on Ca, half position 3 × 10 ^ & lt;-6>M dependence. The Ca binding protein is dependent on the temperature of 28K. The position of the SDSPAGE is higher than that of the protein, and the Ca is free and full. 28K antibody "immunity" writing method is used to dye the antibody. The acid, 30K protein, acid, acid Now that the antibody is in operation, the bureau is deciding on the line, and in the part of the antibody section, there is a determination of the number of antibodies, the number of antibodies,

项目成果

H.Kurokawa & Y.Nonomura: Journal of Biochemistry. 103. 8-10 (1988)

黑川