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脳の可塑性のCa結合蛋白質・リン酸化蛋白質への影響の研究

脑可塑性对Ca结合蛋白和磷酸化蛋白影响的研究

基本信息

批准号：
62221007
负责人：
野々村禎昭
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

中枢神経系におけるCaの役割は最近注目されている. 特に可塑性との関連についてはCa結合蛋白質, リン酸化蛋白質の存在様式と結びつけられる可能性がある. しかしカルモジエリン(CM), S-100蛋白を除いてはあまり研究が行われていない. 我々はすでに小脳でいわゆるビタミンD依存性Ca結合蛋白質の精製とその一次配列を決定したが, その時30KダルトンのCa結合性蛋白質をCaオートラジオグラフィーで認めたのでその精製にとりくんだ.牛小脳をEGTA存在下低イオン強度下で抽出し, 硫安分画で70%飽和から100%飽和分画をとる. ついて陰イオン交換カラムでCaオートラジオグラフィーを参考にしつつイオン強度で流出させるとCMよりさらに高イオン強度で流出される蛋白質があった. しかしこの分画は多量の核酸を含んでおり, DNAseで分解されず, RNAseで分解されるのでRNAであることがわかった. この後HPLCゲル濾過すると30Kダルトンの蛋白質が精製された. 内在性テロシンのCa依存性を調べると半位置で3×10^<-6>Mであった. さらにいわゆる28KダルトンのビタミンD依存性Ca結合蛋白質と比較すると上記の変化もSDSPAGEの位置, Ca有無による変化, 全てで異っている. 28Kの抗体で免疫転写法で染めても染まらない. さらに塩酸加水分解によるアミノ酸組成を調べてみると, この30K蛋白質はロイシン, グルタミンーグルタミン酸, アスパラギンーアスパラギン酸の異常に多い特殊な酸性Ca結合蛋白質であることがわかった. 現在抗体を作製中であり小脳中の局在決定を行い, さらに部分アミノ酸配列からオリゴヌクレオタイドプローブを作製し, cDNAクローニング, 遺伝子クローニングを行っていく予定である.

The central nervous system has recently attracted much attention. The existence of Ca binding protein and acidified protein may be related to plasticity. Research and development of the S-100 white pigment (CM). The purification of Ca-binding protein is determined by the primary alignment of Ca-binding protein. In the presence of EGTA, low intensity and low saturation, sulfur content is 70% saturated and 100% saturated. In the middle of the day, the exchange rate of Ca and Ca is higher than that of the protein. DNA is broken down, RNA is broken down, RNA is broken down. The protein was purified by HPLC after filtration at 30K. Inherent Ca dependence is regulated by 3×10^ M at half position<-6>. D-dependent Ca binding proteins were compared with those in the above list, and Ca was changed with or without D-dependent Ca binding proteins. 28K antibody is immune to the virus. In addition, the 30K protein is a special acidic Ca-binding protein. Now the antibody is in the process of making a decision, and now some of them are in the process of making a decision.