脳の可塑性のCa結合蛋白質・リン酸化蛋白質への影響の研究

脑可塑性对Ca结合蛋白和磷酸化蛋白影响的研究

• 批准号: 62221007
• 负责人: 野々村 禎昭
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62221007/
• 关键词: 小脳Ca結合蛋白質; 30Kダルトン蛋白質; Caオートラジオグラフィー; 酸性蛋白質

中枢神経系におけるCaの役割は最近注目されている. 特に可塑性との関連についてはCa結合蛋白質, リン酸化蛋白質の存在様式と結びつけられる可能性がある. しかしカルモジエリン(CM), S-100蛋白を除いてはあまり研究が行われていない. 我々はすでに小脳でいわゆるビタミンD依存性Ca結合蛋白質の精製とその一次配列を決定したが, その時30KダルトンのCa結合性蛋白質をCaオートラジオグラフィーで認めたのでその精製にとりくんだ.牛小脳をEGTA存在下低イオン強度下で抽出し, 硫安分画で70%飽和から100%飽和分画をとる. ついて陰イオン交換カラムでCaオートラジオグラフィーを参考にしつつイオン強度で流出させるとCMよりさらに高イオン強度で流出される蛋白質があった. しかしこの分画は多量の核酸を含んでおり, DNAseで分解されず, RNAseで分解されるのでRNAであることがわかった. この後HPLCゲル濾過すると30Kダルトンの蛋白質が精製された. 内在性テロシンのCa依存性を調べると半位置で3×10^<-6>Mであった. さらにいわゆる28KダルトンのビタミンD依存性Ca結合蛋白質と比較すると上記の変化もSDSPAGEの位置, Ca有無による変化, 全てで異っている. 28Kの抗体で免疫転写法で染めても染まらない. さらに塩酸加水分解によるアミノ酸組成を調べてみると, この30K蛋白質はロイシン, グルタミンーグルタミン酸, アスパラギンーアスパラギン酸の異常に多い特殊な酸性Ca結合蛋白質であることがわかった. 現在抗体を作製中であり小脳中の局在決定を行い, さらに部分アミノ酸配列からオリゴヌクレオタイドプローブを作製し, cDNAクローニング, 遺伝子クローニングを行っていく予定である.

Department of central god 経 に お け る Ca cut は の service recently attention さ れ て い る. Trevor に plasticity と の masato even に つ い て は Ca binding protein, リ ン acidic protein の existence and others type と び つ け ら れ る possibility が あ る. し か し カ ル モ ジ エ リ ン (CM), S - 100 protein を except い て は あ ま り が line わ れ て い な い. I 々 は す で に small 脳 で い わ ゆ る ビ タ ミ ン dependency Ca D binding protein の refined と そ の a match column を decided し た が, そ の when 30 k ダ ル ト ン の Ca associativity protein を Ca オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー で recognize め た の で そ の refined に と り く ん だ. In the presence of 脳をEGTA, で is extracted at a low <s:1> <s:1> intensity. Sulfur content painting で 70% saturated か ら 100% saturated points draw を と る. つ い て Yin イ オ ン exchange カ ラ ム で Ca オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー を reference に し つ つ イ オ ン flow intensity で さ せ る と CM よ り さ ら に high イ オ ン flow intensity で さ れ る protein が あ っ た. し か し こ の points draw は の nucleic acid を contain abundant ん で お り, Decomposition of DNAse で さ れ ず, RNAse で decomposition さ れ る の で RNA で あ る こ と が わ か っ た. こ の HPLC after ゲ ル filtration す る と 30 k ダ ル ト ン の protein が refined さ れ た. Internality テ ロ シ ン の Ca dependency を adjustable べ る で と half position 3 x 10 ^ < - > 6 M で あ っ た. さ ら に い わ ゆ る 28 k ダ ル ト ン の ビ タ ミ ン D dependency Ca compared with protein と す る と written の variations change も SDSPAGE の position, Ca have に よ る variations, All て で different っ て い る. 28 k で の antibody immune planning writing で dye め て も dye ま ら な い. さ ら に salt acid hydrolysis に よ る ア ミ ノ acid composition を adjustable べ て み る と, こ の 30 k protein は ロ イ シ ン, グ ル タ ミ ン ー グ ル タ ミ ン acid, Youdaoplaceholder0 <e:1> アスパラギ アスパラギ アスパラギ acidic <s:1> abnormal に many な special な acidic ca-binding protein である とがわ とがわ とがわ った った. Now in the antibody を cropping で あ り small 脳 の bureau in determining を い, さ ら に part ア ミ ノ acid with column か ら オ リ ゴ ヌ ク レ オ タ イ ド プ ロ ー ブ を as し, cDNA ク ロ ー ニ ン グ, heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ を line っ て い く designated で あ る.

项目成果

H.Kurokawa & Y.Nonomura: Journal of Biochemistry. 103. 8-10 (1988)

黑川