ヒトcーHaーras遺伝子産物の機能発現の分子機構

人c-Haras基因产物功能表达的分子机制

• 批准号: 01015019
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015019/
• 关键词: がん遺伝子; cーHaーras遺伝子産物; GTP; 2次元NMR; 高次構造; PC12細胞; アザチロシン; 微量注入

正常型および変異型のヒトcーHaーras遺伝子産物(rasタンパク質)を大腸菌により大量調製し、生理的条件下での高次構造を、2次元核磁気共鳴(2DーNMR)により解析した。プロトンシグナルのアミノ酸残基への帰属には、アミノ酸残基の種別に特異的な重水素化法、隣接するアミノ酸残基間での核オーバーハウザー効果(NOE)を利用する配列特異的帰属法、部位特異変異法などを併用した。GDP結合型rasタンパク質では、Asp38〜Val44とCys51〜Asp57との間で逆平行betaシート構造が形成されていることがわかった。このようなNMR解析の結果は、X線結晶解析によりすでに発表されていた結果とは矛盾したが、本研究とほぼ同時に訂正された新しい結果とは一致した。さらに、GTP結合型rasタンパク質では、この逆平行betaシート構造が、Asp38ーSer39とLeu56ーAsp57の部分で開いていることが明らかになった。このように、GDP→GTP交換に伴い、エフェクター部位に含まれるAsp38〜Tyr40と、Mg^<2+>結合に関与するAspー57において、大きな高次構造変化のあることがわかった。他方、rasタンパク質の作用を特異的に阻害する薬物の候補として、ras遺伝子によってトランスフォームしたNIH3T3細胞の増殖を特異的に阻害するアザチロシンを取り上げた。活性化rasタンパク質をPC12細胞に微量注入すると神経様突起の形成が誘起されるが、PC12細胞に対するこのような作用が、NIH3T3細胞の場合と同様の濃度のアザチロシンを培地に加えることにより阻害されることを見いだした。アザチロシンのこのような効果は等量のチロシンによっては打ち消されず、アザチロシンがチロシンのアナログとして作用しているのではないことが示唆された。さらに、rasタンパク質とともにアザチロシンを微量注入しても、培地に加えた場合と同様に、阻害効果が表れたので、アザチロシンの標的が、細胞内に存在することがわかった。

Normal type お よ び - alien の ヒ ト c ー Ha ー ras heritage 伝 zi chan content (ras タ ン パ ク qualitative) を coliform に よ り under the condition of a large number of modulation し, physiological で の を high order structure, two dimensional imaging 気 resonance ー (2 d NMR) に よ り parsing し た. プ ロ ト ン シ グ ナ ル の ア ミ ノ acid residues へ の 帰 genus に は, ア ミ ノ acid residues の kind に specific な heavy water by chemical method, 隣 す る ア ミ ノ acid residues between で の nuclear オ ー バ ー ハ ウ ザ ー unseen fruit (NOE) を using す る match column specific 帰 genera, site specific - different な ど を and し た. GDP type combined with ras タ ン パ ク qualitative で は, Asp38 ~ Val44 と Cys51 ~ Asp57 と の で inverse parallel between beta シ ー が ト structure form さ れ て い る こ と が わ か っ た. こ の よ う analytical results の は な NMR, X-ray crystallization resolution に よ り す で に 発 table さ れ て い た results と は contradiction し た が, this study と ほ ぼ に correction at the same time さ れ た new し い results と は consistent し た. さ ら に, GTP type combined with ras made タ ン パ ク qualitative で は, こ の inverse parallel beta シ ー ト tectonic が, Asp38 ー Ser39 と Leu56 ー Asp57 の part で open い て い る こ と が Ming ら か に な っ た. こ の よ う に, GDP - GTP exchange に made with い, エ フ ェ ク タ に ー parts including ま れ る Asp38 ~ Tyr40 と, Mg ^ 2 + < > combination に masato and す る Asp ー 57 に お い て, big き な high order structural variations change の あ る こ と が わ か っ た. Fang, ras タ ン パ ク qualitative の role を specific に resistance against す る 薬 content の alternate と し て, ras but 伝 に よ っ て ト ラ ン ス フ ォ ー ム し た NIH3T3 cells を specific に の raised colonization resistance against す る ア ザ チ ロ シ ン を take on り げ た. Activation of the ras タ ン パ ク qualitative を PC12 cells に trace injection す る と god 経 others protrusions の form が induced さ れ る が, PC12 cells に す seaborne る こ の よ う な が, NIH3T3 cells と の occasions with others の concentration の ア ザ チ ロ シ ン を petty に plus え る こ と に よ り resistance against さ れ る こ と を see い だ し た. ア ザ チ ロ シ ン の こ の よ う な unseen fruit は equivalent の チ ロ シ ン に よ っ て は play ち さ elimination れ ず, ア ザ チ ロ シ ン が チ ロ シ ン の ア ナ ロ グ と し て role し て い る の で は な い こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, ras タ ン パ ク qualitative と と も に ア ザ チ ロ シ ン を trace injection し て も, cultivated land に plus え と た occasions with others に, resistance against unseen fruit が table れ た の で, ア ザ チ ロ シ ン が の mark, intracellular に す る こ と が わ か っ た.

项目成果

Takaki Hiwasa: "Potentiation of Cystein Proteinase-Inhibitor Activity of Full-length Ha-ras Oncogene Products by Denaturation-Renaturation" Biochem.International. 19. 593-601 (1989)

Takaki Hiwasa：“通过变性-复性增强全长 Ha-ras 癌基因产物的半胱氨酸蛋白酶抑制剂活性”Biochem.International。

Akiko HataーTanaka: "SpinーLabeling Proton NMR Study on Aromatic Amino Acid Residues in the Guanine Nucleotide Binding Site of Human cーHaーras(1ー171)Protein" Biochemistry. 28. 9550-9556 (1989)

Akiko Hata-Tanaka：“人类 c-Haras(1-171) 蛋白鸟嘌呤核苷酸结合位点的芳香氨基酸残基的自旋标记质子 NMR 研究”生物化学 28. 9550-9556 (1989)。

Kazuhiko Yamasaki: "Conformation Change of Effector-Region Residues in Antiparallel beta-Sheet of Human c-Ha-ras Protein on GDP→GTPRS Exchange:A TwoーDimensional NMR Study" Biochem.Biophys.Res.Commun.162. 1054-1062 (1989)

Kazuhiko Yamasaki：“GDP→GTPRS 交换上人 c-Ha-ras 蛋白反平行 β 片中效应器区域残基的构象变化：二维 NMR 研究”Biochem.Biophys.Res.Commun.1054-1062。 (1989)

JongーMyung Ha: "Conformation of Guanosine 5′ーDiphosphate as Bound to a Human cーHaーras Mutant Protein:A Nuclear Overhauser Effect Study" Biochemistry. 28. 8411-8416 (1989)

Jong-Myung Ha：“鸟苷 5-二磷酸与人类 c-Haras 突变蛋白结合的构象：核奥弗豪瑟效应研究”生物化学 28. 8411-8416 (1989)