非翻訳RNAである7SKと転写制因子との複合体の構造研究

7SK（一种非翻译 RNA）与转录调节因子之间复合物的结构研究

• 批准号: 07F07145
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07145/
• 关键词: 転写伸長; P-TEFb; Cdk9; Cyclin T1; HEXIM1; 7SK RNA; 転写制御因子; 非翻訳RNA; 構造生物学

転写伸長反応には、さまざまな伸長因子がRNAポリメラーゼIIに作用する。P-TEFbはその伸長因子の一つで、転写伸長反応を促進する。最近、P-TEFbの働きを制御する7SK非コードRNAとHEXIM1タンパク質が発見された。HEXIM1と7SKはP-TEFbに結合し、P-TEFbによるRNAポリメラーゼIIのリン酸化を抑制する。このように、転写伸長は一連の反応によって制御されていると考えられるが、その詳細な機構については不明な点が多く残されている。また、P-TEFbはエイズやガンなどの疾病との関連が注目されているが、これらの疾病の発症機序においてP-TEFbが果たす役割が明らかになっていない。本研究課題では、転写伸長制御の機構の構造基盤を確立するために、7SK、HEXIM1、P-TEFbおよびそれらの複合体の立体構造をX線解析によって決定することを目的とした。ヒトP-TEFb(Cdk9とCyclin T1)に関して、可溶性が高く、性質の良いコンストラクタを作成するべく条件検討を続けていた。Cdk9については、大腸菌で発現させると、大量に発現したが可溶化率が非常に低く、収量が少なかった。Cyclin T1については、結晶化実験に必要な高純度タンパク質が十分量精製できた。精製できたCyclin T1の結晶化を試みたが、結晶は得られていない。また、Cyclin T1と相互作用するヒトHEXIM1タンパク質を、大腸菌を用いて大量調製する系の確立を行った。高純度タンパク質が十分量精製でき、微結晶を得ることもできた。

Youdaoplaceholder0 write elongation anti応 に 応に, さまざまな elongation factor がRNAポリメラ ゼ ゼIIに action する. P-TEFb で そ <s:1> elongation factor <e:1> で で 転 write elongation inverse 応を promote する. Recently, the P - TEFb の 働 き を suppression す る 7 sk not コ ー ド RNA と HEXIM1 タ ン パ ク qualitative が 発 see さ れ た. HEXIM1 と 7 sk は P - TEFb に し, P - TEFb に よ る RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II の リ ン acidification を inhibit す る. こ の よ う に, planning to write elongation は の in a row against 応 に よ っ て suppression さ れ て い る と exam え ら れ る が, そ の detailed な institutions に つ い て は unknown な point が く more residual さ れ て い る. ま た, P - TEFb は エ イ ズ や ガ ン な ど の disease と の masato even が attention さ れ て い る が, こ れ ら の disease の 発 disease machine sequence に お い て P - TEFb が fruit た す "cut Ming ら が か に な っ て い な い. This research topic で は elongation, written by the planning system of imperial の agencies の structure base plate を establish す る た め に, 7 sk, HEXIM1, P - TEFb お よ び そ れ ら の complex の three-dimensional structure を X-ray analytical に よ っ て decided す る こ と を purpose と し た. ヒ ト P - TEFb (Cdk9 と Cyclin T1) に masato し て, high soluble が く, good nature の い コ ン ス ト ラ ク タ を made す る べ 検 く conditions for を 続 け て い た. Cdk9 に つ い て は, coliform で 発 now さ せ る と, massive に 発 now し た が が solubilization rate very low に く, 収 fewer が な か っ た. Cyclin T1 に つ い て は, crystallization be 験 に necessary な high-purity タ ン パ ク が ten component quality refined で き た. Refining で た た たCyclin T1 <s:1> crystallization を test みたが crystallization to obtain られて られて な な な. ま た, Cyclin T1 と interaction す る ヒ ト HEXIM1 タ ン パ ク を, coliform を with い て large modulation す る line is の established を っ た. High purity タ ン パ ク が ten component quality refined で き, micro crystal を る こ と も で き た.