非翻訳RNAである7SKと転写制因子との複合体の構造研究

7SK（一种非翻译 RNA）与转录调节因子之间复合物的结构研究

• 批准号: 07F07145
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07145/
• 关键词: 転写伸長; P-TEFb; Cdk9; Cyclin T1; HEXIM1; 7SK RNA; 転写制御因子; 非翻訳RNA; 構造生物学

転写伸長反応には、さまざまな伸長因子がRNAポリメラーゼIIに作用する。P-TEFbはその伸長因子の一つで、転写伸長反応を促進する。最近、P-TEFbの働きを制御する7SK非コードRNAとHEXIM1タンパク質が発見された。HEXIM1と7SKはP-TEFbに結合し、P-TEFbによるRNAポリメラーゼIIのリン酸化を抑制する。このように、転写伸長は一連の反応によって制御されていると考えられるが、その詳細な機構については不明な点が多く残されている。また、P-TEFbはエイズやガンなどの疾病との関連が注目されているが、これらの疾病の発症機序においてP-TEFbが果たす役割が明らかになっていない。本研究課題では、転写伸長制御の機構の構造基盤を確立するために、7SK、HEXIM1、P-TEFbおよびそれらの複合体の立体構造をX線解析によって決定することを目的とした。ヒトP-TEFb(Cdk9とCyclin T1)に関して、可溶性が高く、性質の良いコンストラクタを作成するべく条件検討を続けていた。Cdk9については、大腸菌で発現させると、大量に発現したが可溶化率が非常に低く、収量が少なかった。Cyclin T1については、結晶化実験に必要な高純度タンパク質が十分量精製できた。精製できたCyclin T1の結晶化を試みたが、結晶は得られていない。また、Cyclin T1と相互作用するヒトHEXIM1タンパク質を、大腸菌を用いて大量調製する系の確立を行った。高純度タンパク質が十分量精製でき、微結晶を得ることもできた。

Elongation factor plays an important role in RNA synthesis. P-TEFb is a factor of elongation and a factor of elongation. Recently, P-TEFb has been detected by 7SK non-RNA and HEXIM1. HEXIM1 and P-TEFb binding, P-TEFb binding, RNA binding This is the first time that I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. P-TEFb is the key to the development of diseases. The purpose of this study is to determine the three-dimensional structure of the complex of X-ray analysis, such as X-ray analysis, X-ray analysis and X-ray analysis. P-TEFb(Cdk9 and Cyclin T1) is related to high solubility and good properties. Cdk9 is very low in solubility and low in quantity. Cyclin T1 is essential for crystallization and high purity. Refined Cyclin T1 Crystallization test, crystallization test Cyclin T1 interaction with HEXIM1 in the presence of E. coli High purity, high purity, high