ヒトタンパク質上皮成長因子受容体を標的とする阻害剤開発

开发针对人蛋白表皮生长因子受体的抑制剂

• 批准号: 09F09615
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09615/
• 关键词: Protein Kinase; Protein Kinase Inhibitor (PKI); Gefitinib; EGFR mutant; Structure Based Drug Design; Protein Kinase Inhibitor(PKI)

EGFR-TKの結晶構造情報に基づいたインシリコスクリーニングと生化学的アッセイによって当研究室の成果として既に選択された新規な骨格を持つ数種の低分子化合物(ヒット化合物)とイレッサ抵抗性二重変異体EGFR-TKタンパク質の複合体の結晶について、共結晶化法により結晶化のスクリーニングを数多く試み、新規の結晶化条件を探し出し、1つの新規阻害剤について複合体の結晶を作成することに成功した。放射光施設を利用して回折データを収集し、現在構造解析を進め、詳細な化合物結合様式を検討した。複合体は明らかにアポ体とは異なる立体構造をとっていることが示唆された。阻害剤の電子密度図は認められるが、複合体の構造を決定するにはまだ不十分であり、さらによい回折データを収集するため、結晶化条件を精密化する必要がある。イレッサを結合するキナーゼとして、EGFRのほかにもサイクリンG-結合キナーゼ(GAK)が知られている。GAKは癌の抑制に働いていることが最近になって明らかになった。したがって、GAKには結合せず、EGFR特異的に結合する薬剤の開発が重要であると考え、GAKとイレッサの共結晶化に着手した。単結晶を得ることに成功し、現在結晶化条件を最適化している。複合体の立体構造がわかれば、イレッサ認識様式を2つのタンパク質間で比較することが可能となる。この情報はEGFR特異的で安全な薬剤を探索するのに重要となる。一方、その他のキナーゼについても構造解析を進めており、前年度決定したPim1K, AMPKの低分子化合物複合体の結晶構造情報は化合物スクリーニング・薬剤デザインの2サイクル目に投入された。現在AMPKと新規阻害剤との複合体の単結晶を得ることに成功している。

我们试图通过使用iNILICO筛选和生化分析方法，使用共结晶方法筛选了几种小分子化合物（命中化合物）的复合物的许多结晶，并成功地筛选了EGFR-TK-TK蛋白的复合物，以创建新的结晶，并成功地筛选了EGFR-TK-TK蛋白的复合物。使用同步加速器辐射设施收集衍射数据，并进行了当前的结构分析，并研究了详细的化合物结合模式。有人提出，该复合物显然具有与阿属植物不同的三维结构。尽管观察到了抑制剂的电子密度图，但它们仍然不足以确定复合物的结构，并且需要完善结晶条件以收集更好的衍射数据。除EGFR外，细胞周期蛋白G结合激酶（GAK）也被称为与IRESSA结合的激酶。最近已经透露，GAK致力于抑制癌症。因此，我们认为开发不与GAK结合并专门结合EGFR并开始共结晶的药物很重要。成功获得了单晶，并且当前正在优化结晶条件。知道该复合物的构象可以比较两种蛋白质之间的IRESSA识别模式。此信息对于探索EGFR特定和安全的代理很重要。另一方面，对其他激酶的结构分析也正在进行中，去年确定的PIM1K和AMPK的小分子化合物复合物的晶体结构信息是在复合筛查和药物设计的第二个周期中应用的。目前，我们已经成功获得了AMPK复合物和一种新型抑制剂的单晶。