Ras蛋白質によるターゲット活性化のメカニズム

Ras蛋白激活靶点的机制

• 批准号: 10152208
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152208/
• 关键词: Ras; Raf; X線結晶解析; NMR法; EHドメイン

Rasは互いに一次構造上相同性の見られない多くの因子と相互作用し,活性化する.そこで,それらのターゲット認識・活性化機構の間にどのような共通性や特異性があるのかを明らかにすることをめざした.Raf-1のRas-bindingドメイン(RBD)およびCys-richドメイン(CRD)を含む領域(以下,RBD-CRDと略す)については,大腸菌で大量発現を行い,結晶化を行った.その結果,小さいながらも結晶が得られた.また,脂質修飾を受けたRasについてもSf9細胞より調製し,結晶が得られている.RBD-CRDとGMPPNP結合型ファルネシル化Rasとの共結晶については,未だ結晶は得られていない.今後もひきつづき,検討を行っていきたい.全長のRaf-1については,大腸菌内において,GroELなどのシャペロンと共発現を行い,得られたものとHsp90/50と混合する,といった操作を行ってみたが,安定なタンパク質を得ることに成功していない.さらに,Hsp90/50や14-3-3を共存させた状態で大腸菌抽出液を用いた無細胞タンパク質合成系を用いた調製を試していきたい.また,Raf-1のRBDに特異的に結合するRNAアプタマーをin vitroセレクション法により人工的に単離した.そして このRNAアプタマーがGST-Raf-1 RBDとRasとの結合を阻害し,その一方,Rasの標的タンパク質であるRGLのRBDとRasとの結合に関しては阻害しないことを確認した.このアプタマーを用いてRaf-1活性化におけるRasの役割をさらに厳密に明らかにしていきたい.また,Rasのシグナル伝達経路の下流に位置する因子であるPOB1(partner of RalBP1)のEH(Eps15 homology)ドメインの水溶液中の立体構造についてNMR法により決定した.

Ras interaction is the first structural identity and the second structural identity is the second structural identity. Raf-1's Ras-binding domain (RBD) and Cys-rich domain (CRD)(hereinafter,RBD-CRD) are in the process of crystallization. The result is that there is no crystal in the middle of the night. The lipid modification of Ras is mediated by Sf9 cells, and the crystallization of RBD-CRD and GMPPNP binding Ras is mediated by co-crystallization. From now on, we're going to have to go through the motions. The length of Raf-1 was reduced to 100%. In Escherichia coli, the growth rate was reduced to 100%. In Escherichia coli, the growth rate was reduced to 100%. In Escherichia coli, the growth rate was reduced to 100%. Today,Hsp90/50 and 14-3-3 are in the blue shift state. Escherichia coli extract is used in the cell-free plasmid synthesis system. Raf-1 and RBD specific RNA binding in vitro Ras and RGL were identified as the binding sites of Ras and RGL. Raf-1 is activated in the middle of the cell. The position of Ras in the downstream of the Ras pathway is determined by the factor POB1 (partner of RalBP1) and EH(Eps15 homology).

项目成果

白水美香子: "現代医学の基礎1 分子・細胞の生物学I" 岩波書店, 20 (1998)

白水美佳子：“现代医学基础1：分子和细胞生物学I”岩波书店，20（1998）

Nureki,O.: "Enzyme structure with two catalytic sites for double-sieve selection of substrates" Science. 280. 578-582 (1998)

Nureki,O.：“具有两个催化位点的酶结构，用于底物的双筛选择”《科学》。