発癌型Rasに特徴的な細胞内情報伝達機構の解析

致癌Ras细胞内信号转导机制特征分析

• 批准号: 08265210
• 负责人: 横山 茂之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265210/
• 关键词: Ras; Rac; Cdc42; RalGDS; Raf-1; PC12細胞; 多次元NMR法; シグナル伝達経路

PC12細胞においてデキサメタゾンにより発現を誘導する系を用いて解析した結果,優性抑制型Ral,Cdc42について,NGFによる神経様突起形成に対して阻害効果がみられた.したがって,これらの因子は正常なシグナル伝達においても重要であることが示唆され,発癌型Rasに特徴的な経路に位置する可能性は低いと考えられた.また,PC12細胞において優性抑制型または活性化型のRho,Rac,Cdc42などをGFPと同時に一過的に発現させ解析を試みているが,さらに系を改良した後,MAPKの活性化をひきおこすが,分化を誘導できないRas変異体と組み合わせて解析を行う予定である.RaplAは,発癌型Rasによりtransformした細胞形態を正常に戻す低分子量GTP結合タンパク質であり,Rasとの相同性は高いが,RalGDSにはRaplAの方が強く,Raf-1にはRasの方が強く結合する.本研究において,Rasの31番目のアミノ酸残基について多種類の変異体を作成し解析を行った結果,31番目のアミノ酸残基がRas型の酸性アミノ酸である場合にのみRalGDSとの結合能が低下し,Rap1A型の塩基性アミノ酸である場合にのみRaf-1との結合能が低下した.つまり,どちらの場合も,Rasの31番目の残基がターゲット側のある残基と反発することが結合能を低下させると考えられ,31番目の残基がRaf-1/RalGDSに対するRas/RaP1Aの特異性を決定する主要な残基であることが明らかとなった.また,RalGDSファミリーに属するRGLのRas結合ドメイン(RBD)について,多次元NMR法により立体構造の解析を行っているが,Raf-1のRBDと似た二次構造をとっているという予備的な結果が得られている.さらに,GMPPNP結合型Rasタンパク質とRGLのRBDとの複合体についてもNMR解析を試みている.

PC12 cells were analyzed for the inhibition of Ral, Cdc42,NGF and the inhibition of neurogenesis. The probability of the occurrence of cancer is very low. In addition, PC12 cells were also characterized by the activation of Rho,Rac, Cdc42, GFP, and MAPK, the induction of differentiation, and the formation of Ras heterografts.RaplA cells were characterized by low molecular weight GTP binding. The identity of Ras is high,RalGDS is high,Raf-1 is high, Ras is high. In this study, the binding energy of Ras-31 amino acid residues was lower than that of Ras-31 amino acid residues, and the binding energy of Ral-1A amino acid residues was lower than that of Ras-1A amino acid residues. In this case, residues in Ras 31 are the main residues that determine the specificity of Ras/RaP1A. Ras and RBD of RalGDS belong to RGL, and the results of analysis of stereo structure by multiple element NMR method are obtained. In addition, NMR analysis of GMPPNP bound Ras complex was attempted.

项目成果

Shinkai,M.: "Differential in the Mechanism of Raf-1 and B-Raf with H-Ras" Biochem.Biophys.Res.Commun.223. 729-734 (1996)

Shinkai,M.：“Raf-1 和 B-Raf 与 H-Ras 机制的差异”Biochem.Biophys.Res.Commun.223。

Akashi,S.: "Detection of Molecular Ions of Non-Covalent Compleses of Ras・GDP and Ras・GppNp by MALDI-TOFMS" J.Mass Spectrom.Soc.Jpn.44. 269-277 (1996)

Akashi, S.：“通过 MALDI-TOFMS 检测 Ras·GDP 和 Ras·GppNp 的非共价复合物的分子离子”J.Mass Spectrom.Soc.Jpn.44 (1996)。

Akasaka,K.: "Differential Structural Requirements for Interaction of Ras Protein with Its Distinct Downstream Effectors" J.Biol.Chem.271. 5353-5360 (1996)

Akasaka,K.：“Ras 蛋白与其独特的下游效应器相互作用的不同结构要求”J.Biol.Chem.271。

Ishima, R.: "Gaussian Spectral-Density Function for Protein Internal Motions" J.Magn.Reson.Ser.B. 111. 281-284 (1996)

Ishima, R.：“蛋白质内部运动的高斯谱密度函数”J.Magn.Reson.Ser.B。

Yokomizo,H.: "Augmentation of Immunue Response by an Analog of the Antigenic Peptide in a Human T-cell Recognizing Mutated Ras-derived Peptides" Human Immunology. (in press).

Yokomizo,H.：“通过人类 T 细胞中识别突变 Ras 衍生肽的抗原肽类似物增强免疫反应”人类免疫学。