バゾプレッシンV_2受容体分子構造の研究

加压素V_2受体分子结构研究

基本信息

  • 批准号:
    63570089
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1988
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1988 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

バゾプレッシンV_2受容体は腎臓の集合尿細管に存在し、アデニル酸シクラーゼに共役する刺激型の受容体である。この受容体の分子構造を知るために、ブタ腎臓由来の培養細胞(LLC-PK1)から得られたメッセンジャーRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入し、V_2受容体を発現させた所、この受容体をコードするメッセンジャーRNAの大きさが16Sであることが判明した。LLC-PK1培養細胞から、チオシアン酸グアニジン一塩化セシウム超遠心分離法により全RNAを抽出し、オリゴdTセルロースカラムクロマトグラフでポリ(A^+)RNAを精製した。このポリ(A^+)RNAをさらに10-30%蔗糖密度勾配超遠心分離によって分画した。成熟した雌性アフリカツメガエルから卵母細胞を取出し、上記の各分画を微量注入して、V_2受容体の発現を待った。4日後に卵母細胞膜をホモジナイズして、その細胞膜中のアデニル酸シクラーゼ活性を、10^<-7>Mアルギニンバゾプレッシンの存在下あるいは非存在下で測定し、V_2受容体の発現の有無を調べた。16Sの大きさを持つポリ(A^+)RNAを注入された卵母細胞膜中にのみV_2受容体の存在が認められた。また当然のことながら、このバゾプレッシン依存性のアデニル酸シクラーゼ活性上昇は、10^<-5>MのバゾプレッシンV_2拮抗薬〔d(CH_2)5、Tyr(OEt)^2〕AVPによって拮抗された。
The receptor V_2 was found to be stimulated by the presence of urine tubule in the kidney. The molecular structure of the receptor was known and the origin of the receptor was identified by culture cells (LLC-PK1). LLC-PK1 culture cells were isolated and purified from whole RNA by ultra-telecentric isolation. The concentration of (A^+)RNA was 10-30% sucrose density, and the separation was performed by ultra-telecentric separation. Mature female oocytes were extracted and microinjected into the above cells, and V_2 receptors were recovered. After 4 days, the activity of V_2 receptor in oocyte membrane was measured in the presence or absence of 10 μ <-7>M V_2 receptor. The presence of V_2 receptors in oocyte membrane was recognized by the injection of 16S RNA into oocyte membrane. The <-5>activity of the V_2 antagonist [d(CH_2)5, Tyr(OEt)^2] was increased by 10^ M.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Koji,Kimura: Japanese Journal of Pharmacology (suppl.). (1989)
Koji,Kimura:日本药理学杂志(增刊)。
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    0
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