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ヒト肝細胞増殖因子の産生臓器

产生人肝细胞生长因子的器官

基本信息

批准号：
63570295
负责人：
坪内博仁
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570295/
关键词：
肝細胞増殖因子劇症肝炎 Kupffer細胞

项目摘要

(1)ヒト肝細胞増殖因子(hHGF)の精製劇症肝炎患者の血漿交換療法時にえられた血漿より、申請者らの確立した方法すなわち加熱(56°C・15分間)、硫安分画、アフィゲルブルーヘパリンセファロース、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーの5つのステップによりhHGFを精製した。約10名の患者血漿15lより約500μgの精製hHGFを得た。(2)hHGFに対する特異抗体の作製(1)モノクローナル抗体の作製:hHGFでBALB/Cでマウスを免疫し、その脾細胞とミエローマ細胞P_3U_1細胞を混合比10:1で混合し、ポリエチレングリコール1500を用いて隔合した。細胞融合後脾細胞を24穴dishにまき、培養しその上清の抗体価を酵素免疫抗体測定法(ELISA)により測定した。ELISAにより陽性細胞を検出し、クローニングをくりかえし最終クローンを得た。そのクローンをBALB/Cマウス腹腔に接種し腹水を回収し、MAPSキットにて抗体を精製した。(2)ポリクローナル抗体の作製:hHGF溶液とcomplete Fround Adjuvantをよく混合し、ウサギに接種してELISAにより血清中の抗体価を測定した。抗体価の上昇している血清よりMAPSキットにより精製した。これらのモノクローナル抗およびポリクローナル抗体はWesternblottingにより精製hHGFと反応した。(3)hHGF産生臓器の検討抗hHGF抗体を用いて、まずラットの肝・消化管・膵・脳を対象として免疫組織化学的にhHGFの産生臓器を検討したが、抗hHGF抗体で染色される組織はえられなかった。そこで、次にニホンザルの各組織を対象として、同様の検索を行ったところ、肝のKupffer細胞が染色された。劇症肝炎患者の剖検時の各組織を対象としたが、陽性の組織はえられなかった。今後さらに新鮮な組織を対象として検索することが必要である。

(1)Purification of Hepatocyte Growth Factor (hHGF) During plasma exchange therapy for patients with severe hepatitis, the method of establishment of the applicant is heating (56°C·15 min), sulfur painting, recovery, purification of hHGF. About 10 patients plasma 15L ~ 500μg of purified hHGF was obtained. (2) Preparation of hHGF specific antibody (1) Preparation of hHGF specific antibody:hHGF BALB/C immune system, spleen cells and P_3U_1 cells were mixed at a ratio of 10:1 and isolated at a ratio of 1500. After cell fusion, spleen cells were cultured in a 24-point dish and the supernatant was assayed by ELISA. ELISA positive cells were detected, and finally detected. BALB/C is the only way to purify antibodies. (2)Preparation of antibodies:hHGF solution and complete Fround Adjuvant are mixed, inoculated and detected by ELISA. Antibody levels rise in the serum, MAPS levels rise in the serum, MAPS levels rise in the serum and MAPS levels rise in the serum. This is the first time that we've had a problem with Western blotting, and we've had a problem with Western blotting. (3) Detection of hHGF producing organs and staining of anti-hHGF antibodies in liver, digestive tract and liver tissues. All tissues were stained with the same dye and Kupffer cells were stained with the same dye. In patients with acute hepatitis, the tissues are opposite to each other, and the positive tissues are opposite to each other. In the future, it will be necessary to organize a new organization.