自己抗体で認識される自己抗原分子上のエピト-プ領域の分子生物学的解析

自身抗体识别的自身抗原分子表位区域的分子生物学分析

• 批准号: 01570353
• 负责人: 山本 一彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570353/
• 关键词: 自己免疫疾患; 自己抗体; cDNA; エピト-プ

自己免疫疾患患者血清中に出現する自己抗体の産生機序を追求する目的で、自己抗原を規定するcDNAをクロ-ニングし、これを蛋白発現プラスミドに組み換えてリコンビナント自己抗原を発現させた。このcDNAの3'末端からエクソヌクレア-ゼIIIにてDNAを削っていき、種々の削除変異株を作成し、それぞれを蛋白発現させた。これら蛋白をノムノブロットや、既に確立している固相酵素抗体法(ELISA)を用いて患者血清との反応性を検討した。シェ-グレン症候群患者血清が特異的に反応するSS-B/La蛋白については、2つの主要エピト-プ領域の存在を確認し、この1つのエピト-プのアミノ酸配列がfeline sarcomaウィルスのgag蛋白と相同であることを見いだした。現在、ウィルス感染と抗SS-B/La抗体の産生についての関与をより詳細に検討しているところである。MCTDやSLE患者血清に認められる抗RNP抗体については、その対応抗原であるU1snRNPの68K蛋白、A蛋白、C蛋白についてエピト-プマップを行い、その主要なエピト-プ領域を同定した。その結果、68K蛋白については、RNA結合部位、C末荷電部位などの機能的に重要な領域に、A蛋白はU2snRNPのB"蛋白と相同性のあるC末に、またC蛋白ではSm抗原のB/B'蛋白と相同性のある領域に主要エピト-プに存在が見いだされた。現在これらの結果をふまえて、抗RNP抗体産生が、自己抗原そのものの免疫によるものなのか、外来の異物との相同性部位への免疫反応が引き金となっているかを検討中である。

The mechanism of antibody production in the serum of patients with immune disorders is aimed at regulating the expression of cDNA and proteins. The 3'end of the cDNA was cut off and the mutant was produced. The enzyme assay (ELISA) was used to detect the activity of serum from patients. The presence of SS-B/La protein in the serum of patients with SIRS was confirmed. The presence of SS-B/La protein in the serum of patients with SIRS was confirmed. The presence of SS-B/La protein in the serum of patients with SIRS was confirmed. Now, the relationship between infection and anti-SS-B/La antibody production is discussed in detail. MCTD and SLE patients serum anti-RNP antibodies are identified, and anti-RNP antigens are identified, such as U1snRNP 68K protein, protein A, and protein C. The results showed that 68K protein was the most important domain for RNA binding site, C terminal charged site and function, protein A U2snRNP and B"protein identity was the most important domain for Sm antigen B/B" protein identity was the most important domain for C protein. The results showed that anti-RNP antibody production, immune response to self-antigen, immune response to foreign body and the same site were discussed.

项目成果

H.Fujii: "The UlsnRNP68K protein contains two universal epitopes that are located within the UlRNA binding domain and within a carboxy terminal charged vegion"

H.Fujii：“UlsnRNP68K 蛋白包含两个通用表位，分别位于 UlRNA 结合域和羧基末端带电离子内”

H.Kohsaka: "Molecular cloning of cDNAs expressing SS-B/La protein" J.Autoimmunity. 2. 353-357 (1989)

H.Kohsaka：“表达 SS-B/La 蛋白的 cDNA 的分子克隆”J.自身免疫。

H.Kohsaka: "Fine epitope mapping of the human SS-B/La protein:identification of a distinct autoepitope homologous to a vial gag protein" J.Clin.Invest.

H.Kohsaka：“人类 SS-B/La 蛋白的精细表位作图：鉴定与小瓶 gag 蛋白同源的独特自身表位”J.Clin.Invest。