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下垂体におけるペプチジルアルギニンデイミナ-ゼの機能的意義の研究

垂体肽基精氨酸脱亚氨酶的功能意义研究

基本信息

批准号：
01580204
负责人：
千秋達雄
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

下垂体におけるペプチジルアルギニンデイミナ-ゼ(PAD)の機能的意義を検討するため、ラット骨格筋型PADのcDNAのクロ-ニングとそれをブロ-ブとした下垂体中のPADmRNAの検出、PAD産生細胞と個々の下垂体前葉ホルモン産生細胞の詳細な対応、培養下垂体細胞株を用いたPAD産生に及ぼすエストロゲンの影響、下垂体内在性PAD基質タンパク質の検出条件等について研究を行った。得られたcDNA配列には665個のアミノ酸からなるポリペプチドをコ-ドする領域が含まれており、その分子量は75,122と算定された。性周期周回中の雌ラット下垂体中のPADmRNA量は休止期と発情期前後に高く、発情期にはほとんど消滅し、発情後期は少量検出された。従ってmRNAで見た変動は、従来の研究で観察されたPADのタンパクレベルの変動とは振幅のみならず位相の点でも相違することが明らかになった。また、ラット2倍体下垂体細胞株(MtT/S)を適切な培養条件に置くと、生理的濃度の17βーEstradiolによって細胞中のPAD活性が数倍上昇すること、この反応はエストロゲンに特異的に起こること、また活性上昇は生合成促進を伴ったPADの実量の増加を反映していることが見つかった。この結果から、エストロゲンは視床下部を介さず直接的に下垂体に作用してPAD含量を調節しうることが示唆された。PADの局在に関しては、ペルオキシダ-ゼ法により抗PAD血清で染色した下垂体のやや厚切り切片を樹脂に包埋後、準薄切切片を作成し脱樹脂処理を行ってから蛍光抗体法により個々の抗前葉ホルモンで染色する方法でPAD陽性細胞がプロラクチン陽性細胞とのみ部分的対応を示すことを確認した。内在性基質タンパクについては、PADの反応による荷電の減少の分析のため、2次元電気泳動の諸条件の至適化を終えた段階に達した。

The significance of the function of the pituitary gland におけるペプチジルアルギニンデイミナ-ゼ(PAD) を検するため、ラットbone Grid-type PAD cDNA のクロ-ニングとそれをブロ-ブとしたPADmRNA 検出 in the pituitary gland, PA D-producing cells and pituitary gland anterior lobe ホルモン-producing cells are detailed and cultured pituitary gland cell lines are produced using いたPAD Research on the effects of に和ぼすエストロゲンの, pituitary intrinsic PAD matrix タンパク性の検out conditions, etc. についてを行った. Obtained られたcDNA array には 665 のアミノ acid からなるポリペプチドをコ-The field of ドするがcontains まれており, the molecular weight of その is 75,122, and the calculation is された. The amount of PADmRNA in the female pituitary gland during the sexual cycle is high during the telogen period and before and after the estrus period, is eliminated during the estrus period, and is released in small amounts in the late estrus period.従ってmRNAで见た変动は、従来の研究で観看されたPADのタンパクレベルの変动とは amplitude のみならずphase のpoint でも conflict することが明らかになった. The PAD activity of the 17β Estradiol cells in the MtT/Rato diploid pituitary cell strain (MtT/S) was several times higher in appropriate culture conditions and physiological concentrations. Rise of すること, この Reflection of はエストロゲンにSpecial にrise of こること, また activity rises The biosynthetic promotion is accompanied by the increase in the amount of PAD and the reflection of the increase in the amount of PAD. The result of the test is that the lower part of the bed is directly affected by the pituitary gland, and the PAD content is regulated by the pituitary gland. The PAD Bureau is stained with anti-PAD serum, and the pituitary gland is thick-cut and sectioned with resin. After embedding in resin, the quasi-thin sections are made and deresinized. PA D-positive cells are positive cells and the part of the positive cells is confirmed. Intrinsic matrix タンパクについては, PAD のにによるcharge の ANALYSIS のため, 2-dimensional electrophoresis の various conditions to the optimum を final えた stage に达した.