薬物誘導型P-450遺伝子の転写課程に関与する蛋白性因子のCDNAクロ-ニング
药物诱导 P-450 基因转录过程中涉及的蛋白质因子的 cDNA 克隆
基本信息
- 批准号:01580182
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1989
- 资助国家:日本
- 起止时间:1989 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
チトクロ-ムP-450b、P-450c遺伝子のプロモ-タ-領域には更に上流に存在するエンハンサ-と協同して遺伝子の転写過程に重要な役割を持つ共通のシスのエレメントが存在する。このBTEと名づけたDNA領域にはその塩基配列を認識して特異的に結合する蛋白性因子が存在することをDNaseIフットプリント法、ゲルシフトアッセイ法によって確認した。またSouth-Westernプロット法によりこの蛋白性因子の分子量は約56KDaであることが判明した。BTE塩基配列をもったオリゴヌクレオチドを合成し、これをプロ-ブとしてλgt11ファ-ジをベクタ-としたcDNAライブラリ-(ラット肝由来)をスクリ-ニングした結果、二、三のクロ-ンが単離でき、そのうちの一つをくわしく解析した。まずこのcDNAをT7のプロモ-タ-をもつプラスミドに結合し、大腸菌で発現させたところ、粗抽出液を用いた結果であるが、ゲルシフトアッセイでBTE結合能を有していた。またこの遅れて泳動するバンドは非標識のBTEで特異的に消失した。この抽出液でDNaseIフットプリントを行なった結果、培養細胞の核抽出液を用いた結果と全く同じ領域が保護された。このcDNAクロ-ンの塩基配列を決定した結果、完全長のクロ-ンではなかったがこの蛋白質はカルボキシ末端付近にシスティン残基2コとヒスチジン残基二コからなるZincフィンガ-構造を3回くり返して保持していた。この部分がDNAに結合するドメインであると考えられる。
P-450b and P-450c are the most important parts of the transmission process. The BTE domain recognizes the presence of specific binding protein factors, such as DNA, DNA, and DNA. The molecular weight of this protein factor is about 56KDa. BTE gene sequence is divided into two parts: the first part is composed of two parts, the second part is composed of three parts, and the third part is composed of three parts. BTE binding activity was detected in the presence of E. coli and crude extract. This is the first time that a BTE has been identified. The DNA extract was used to protect the cells. As a result, the complete length of the cDNA sequence was determined, and the protein sequence was maintained at the end of the sequence. This part of the DNA is bound to the DNA.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
K.Sogawa: "Repression of Cytochrome P-450c Gene Expression by Cotransfection with Adenovirus Ela DNA" Eur.J.Biochem.181. 539-544 (1989)
K.Sokawa:“通过与腺病毒 Ela DNA 共转染抑制细胞色素 P-450c 基因表达”Eur.J.Biochem.181。
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- 影响因子:0
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Y.Yanagida: "A Novel Cis-Acting DNA Element Required for a high Level of Inducible Expression of the P-450c Gene" Mol.Cell.Biol.
Y.Yanagida:“P-450c 基因高水平诱导表达所需的新型顺式作用 DNA 元件”Mol.Cell.Biol。
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十川 和博其他文献
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