免疫グロブリンH鎖遺伝子の再構成に関与する核内因子のcDNAクロ-ニング

参与免疫球蛋白重链基因重排的核因子的cDNA克隆

• 批准号: 01570268
• 负责人: 杉山 治夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570268/
• 关键词: 免疫グロブリン遺伝子の再構成; recombinase

Abelsonウイルスの温度感受性変異株(ts mutant)を分離し、このウイルスでトランスフォ-ムしたマウス未熟B系細胞株を樹立し、35℃での培養では、モノクロ-ナルに増殖するが、39℃で培養すると、免疫グロブリン遺伝子の再構成が誘発される系を確立し、この系を用いて、免疫グロブリンH鎖遺伝子の再構成機構に関与する遺伝子をクロ-ニングすることを、平成元年度の研究目的として来た。先ず、免疫グロブリン遺伝子の再構成をおこしている細胞よりcDNAを合成し、他方、全く再構成を起こさない細胞から作ったcDNA間で、differentical hybcidization法で、再構成に特異的なcDNAクロ-ンの単離を試みたが特異的なcDNAクロ-ンを単離することができなかった。そこで、手法を改め、現在、subtraction法を用いて、特異的クロ-ンの単離を試みている。一方、タンパクレベルからの解析も進めて来た。recombinaseが認識すると考えられているsignal配列を合成し、この合成signal配列を用いたAffinityカラムを用いて、現在、signal配列特異的結合タンパクの精製を現在すすめている。

Abelsonウ ス ス ス ウ temperature-sensitive variants (ts. Mutant) を separation し, こ の ウ イ ル ス で ト ラ ン ス フ ォ - ム し た マ ウ ス unripe B cell lines を establish し, 35 ℃ で の cultivate で は, モ ノ ク ロ - ナ ル に raised colonization す る が, 39 ℃ で cultivate す る と, immune グ ロ ブ リ ン heritage 伝 son の reconstitution が 発 lure さ れ る を established し, こ の is を with い て, immune グ ロ ブ リ ン H Lock heritage 伝 の son again constitute institutional に masato and す る posthumous son 伝 を ク ロ - ニ ン グ す る こ と を, pp.47-53 yuan annual の research purpose と し て た. ず first, immune グ ロ ブ リ ン posthumous son 伝 の reconstitution を お こ し て い る cells よ り cDNA を synthetic し constitute を again, fang, full く こ さ な い cells か ら as っ た で, differentical between cDNA Hybcidization で, then constitute に specific な cDNA ク ロ - ン の 単 from を try み た が specific な cDNA ク ロ - ン を 単 from す る こ と が で き な か っ た. そ こ で, gimmick change を め, now, subtraction method を い て, specific ク ロ - ン の 単 from を try み て い る. One party, タ パ パ レベ レベ ら ら <s:1> parses めて into めて た. Recombinase が know す る と exam え ら れ て い る signal with column を synthetic し, こ の synthetic signal matched with column を い た Affinity カ ラ ム を with い て, now, signal with the combination of column specific タ ン パ ク の refined を now す す め て い る.

项目成果

T.Komori: "A novel V_HDJ_H to J_H joining that induces H chain production in an IgーNull Immature B cell line." J.Immunol.143. 1040-1045 (1989)

T.Komori：“一种新的 V_HDJ_H 与 J_H 连接，可在 Ig-Null 未成熟 B 细胞系中诱导 H 链产生。J.Immunol.1040-1045 (1989)。”

Y.Oka: "Isolation and characterization of temperatureーsensitive mutants of Abelsen murine leukemia virus that exhibit dissociation among morphological transformation,soft agar colonyーforming ability and tyrosine kinase activity." J.Gen.Virol.70. 2527-2532

Y.Oka：“Abelsen 鼠白血病病毒温度敏感突变体的分离和表征，该突变体表现出形态转化、软琼脂集落形成能力和酪氨酸激酶活性之间的分离。”J.Gen.Virol.70。

S.Miyake: "Identification of a recombinational signal sequencespecific DNAーbinding protein(s)of Mr 115,000 in the nuclear extracts from immature lymphoid cell lins." J.Immunol.(1990)

S.Miyake：“未成熟淋巴细胞核提取物中 115,000 号先生的重组信号序列特异性 DNA 结合蛋白的鉴定。J.Immunol。”

H.Sugiyama: "Infrquent utilization of the immunoglobulin heavy chain variable region(s)identical or closely related to that of MOPC315 myeloma protein in the functional V region formaation in Bーprecursor cell lines." Immunology. 68. 453-475 (1989)

H.Sugiyama：“在 B 前体细胞系的功能性 V 区形成中很少使用与 MOPC315 骨髓瘤蛋白相同或密切相关的免疫球蛋白重链可变区。”68. 453-475 (1989) ）

T.Maeda: "The DJ_H complex remains active in recombination to V_H segments after the loss of μーchain expression in μーpositive preーB cells." J.Immunol.142. 3652-3656 (1989)

T.Maeda：“在 μ 阳性前 B 细胞中 μ 链表达缺失后，DJ_H 复合物在与 V_H 片段的重组中保持活性。”J.Immunol.142 (1989)。