染色体切断末端の治癒修復の特異性とその認識因子

染色体断裂末端愈合修复的特异性及其识别因素

• 批准号: 01580254
• 负责人: 丹羽 修身
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580254/
• 关键词: テロメア; 動原体; 分裂酵母; 染色体切断

切断された染色体末端の安定化の条件の一つとして、テロメア配列の結合による治癒修復があげられる。この治癒修復にはテロメアDNA配列合成酵素であるテロメラ-ゼが関与する可能性が高い。本研究は染色体切断末端へのテロメア配列の付加反応において、基質となる切断末端のDNA塩基配列に特異性があるかどうかを明らかにすることを目的とした。先に我々は分裂酵母において、ガンマ線によって誘発される染色体切断を利用して、約1100キロ塩基対(Kb)の極小ミニ染色体(ch10)を分離したが、種々の証拠からその末端は分裂酵母第3染色体動原体の反復DNA領域内におることが示唆された。そこで、パルスフィ-ルド電気泳動法で分離したch10DNAを抽出し、いくつかの制限酵素で消化後、テロメアDNAをプロ-ブとするサザン法で末端から最も近い位置にある各制限酵素の切断位置を決定した。このようにして作成したch10DNAの末端付近の制限酵素地図を、すでに塩基配列も決定されている動原体反復配列dg-dhの制限酵素地図と比較したところ、左端はdgの内部、右端はおそらくdg-dhの境界付近にあることが判明した。しかし、切断位置近傍にテロメア反復配列に類似した塩基配列などの特徴的な配列は見い出されず、左右両端間にも顕著な相同配列は認められなかった。本研究では又、これとは別に、直線状DNAによる形質転換を用いて環状ミニ染色体を作成する方法を開発し、第3染色体動原体を含む約100Kbの環状染色体を分離した。これは上述のch10とほぼ同じ分子量のDNAからなるが、有糸分裂においては数十倍も不安定であった。このことを利用すると、環状染色体の直線化にともなう安定化と、その末端配列の共通性をより正確に検討できる系となると思われる。又、染色体の安定保持におけるテロメアの機能を、動原体機能と分けて解析できる系でもある。

Cutting off the ends of chromosomes and stabilizing the condition of the condition, and combining the chromosomal ends with healing and repairing. The healing and repairing enzyme DNA alignment synthesis enzyme is high-potential. In this study, the end of the chromosome was cut off, and the matrix was cut off. The specificity of the terminal DNA base arrangement is the same as the specific one. First, we use fission yeast to cut yeast, and use ガンマ线によって to induce 発されるchromosome cutting and use it, and use the extremely small ミニ dyeing of about 1100 キロ塩塩対(Kb) Body(ch10)をisolationしたが、seed々の证拠からそのendは fission yeast chromosome 3 kinetoplasma のrepetitive DNA domain におることが Shows instigation された.そこで、パルスフィ-ルドelectrophoresis methodでSeparationしたch10DNAをExtractionし、いくつかのAfter restriction enzyme digestion, The テロメアDNA をプロ-ブとするサザン method is determined by the end and the closest position and the cutting position of each restriction enzyme. Made of このようにしてしたch10DNAのterminal restriction enzyme groundコを、すでに塩base arrangementもdeterminationされているkinetoplasm repeated arrangement dg -dhのRestricted enzyme ground 図と comparison したところ, left end はdg の internal, right end はおそらくdg -dh の realm close にあることが clarified した. The しかし, the cutting position is close to the にテロメア Repeated Arrangement is similar to the した塩 Basic Arrangement などの特徴The arrangement is the same as the arrangement, and the arrangement is the same as the arrangement of the left and right sides. In this study, the linear DNA was transformed into a circular chromosome using a circular chromosome. The method of making it is to isolate and isolate the kinetoplasma of chromosome 3, which contains a circular chromosome of about 100Kb. The above-mentioned のch10 とほぼhas the same molecular weight as the のDNA からなるが, and the strand splitting においては is dozens of times unstable and であった.このことを Utilize すると, linearization of circular chromosomes, and stabilization ofそのTerminal arrangement の commonality をより correct に検question できるsystem となると思われる. In addition, the stability of chromosomes is maintained and the functions of chromosomes are maintained, and the functions of kinetogens are analyzed and analyzed.

项目成果

J.B.Fan: "Construction of a NotI restriction map of the fission yeast Schizosaccheromyces pombe genome" Nuc.Acids Res. 17. 2801-2818 (1989)

J.B.Fan：“裂殖酵母裂殖酵母基因组的 NotI 限制性图谱的构建”Nuc.Acids Res。

Y.Chikashige: "Composite motifs and repeat symmetry in S.pombe centromeres:direct aralysis by integration of NotI resriction sites" Cell. 57. 739-751 (1989)

Y.Chikashige：“粟酒裂殖酵母着丝粒中的复合基序和重复对称性：通过整合 NotI 限制位点进行直接分析”细胞。

O.Niwa: "Characterization of Schizosaccharomyces pombe minichromosome deletion derivatives and a functional allocation of their centromeres" EMBO J.8. 3045-3052 (1989)

O.Niwa：“粟酒裂殖酵母微型染色体缺失衍生物的表征及其着丝粒的功能分配”EMBO J.8。