受容体型チロシンキナ-ゼを介する情報伝達機構

受体酪氨酸激酶介导的信息传递机制

• 批准号: 03152085
• 负责人: 春日 雅人
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152085/
• 关键词: PIー3キナ-ゼ; GAP; IRSーI; MAPキナ-ゼ

我々はインスリン受容体cDNAならびにEGF受容体cDNAをsiteーdirected mutagenesisの手法により改変し、合計10種以上の変異受容体のcDNAを作製した。これらのcDNAをChinese hamster ovary(CHO)細胞に発現させることに成功した。現在、これらのCHO細胞を用いて変異受容体の機能について解析中である。各種の受容体型チロシンキナ-ゼの細胞内基質蛋白のひとつと考えられているphosphatidyl inositol(PI)ー3キナ-ゼの85Kサブユニットを大腸菌に発現させ、これを抗原としてモノクロナル抗体を作製した。その結果3種類のモノクロナル抗体を得ることができ、85Kサブユニット各部分を大腸菌に発現させた蛋白との反応からそのエピト-プ部位を同定することができた。さらにこれらのモノクロナル抗体を用いて、この抗体がInsulin Receptor SubstrateーI(IRSーI)ならびにGTPase Activating protein(GAP)を免疫沈降する可能性が示唆された。すなわち、細胞をインスリンで刺激するとIRSーIがチロシン燐酸化され、この部分が85KやGAPのSHー2ドメインで認識される可能性が示唆された。さらに,PIー3キナ-ゼの110Kサブユニットと85Kサブユニットの結合部位も上記の大腸菌に発現した85Kサブユニットのフラグメントを用いて同定された。各種の受容体型チロシンキナ-ゼの細胞内基質蛋白がひとつと考えられているMAPキナ-ゼについても抗体を作製し、その変異体を培養細胞に発現し、情報伝達機構における役割を検討中である。また85Kサブユニットについても、その変異体を作製し培養細胞中に発現して、その情報伝達機構における役割を検討中である。また、IRSーIに対するモノクロナル抗体も作製予定である。

The method of site-directed mutagenesis of EGF receptor cDNA was modified to produce cDNA of more than 10 different receptors. This cDNA was successfully developed in Chinese hamster ovary(CHO) cells. Now, CHO cells are used to analyze the function of different receptors. A variety of receptor-type intracellular matrix proteins are detected in phosphosyl inositol(PI)-3-85 The results showed that 3 kinds of antibodies were found in different parts of Escherichia coli, and the protein was found in different parts of Escherichia coli. The use of these antibodies and the possibility that these antibodies may be immune to Insulin Receptor Substrate I(IRS I) and GTase Activating Protein(GAP) are also discussed. The possibility of IRS I phosphorylation and partial recognition of 85K and SH 2 in cells was demonstrated. In addition,PI-3- A variety of receptor types of intracellular matrix proteins have been developed and studied in vitro. 85K The IRS is responsible for the preparation of antibodies.

项目成果

Tobe,K.,Kadowaki,T.,Tamemoto,H.,Ueki,K.,Hara,K.,Koshio,O.,Momomura,K.,Gotoh,Y.,Nishida,E.,Akanuma,Y.,Yazaki,Y.,Kasuga,M.: "Insulin and 12-O-teradecanorylphobol 13-acetate(TPA)activation of two immunologically distinct MBP/MAP2 kinases viade hovo phosphory

户部K.、门胁T.、为本H.、植木K.、原K.、小潮O.、桃村K.、后藤Y.、西田E.、赤沼Y.、

Yonezawa,K.,Yokono,K.,Shii,K.,Ogawa,W.,Ando,A.,Hara,K.,Baba,S.,Kaburagi,Y.,Yamamoto-Honda,R.,Momomura,K.,Kadowaki,T.,Kasuga,M.: "In Vitro association of phasphatidylinasitol 3-kinase activity with the activated insulin receptor tyrosine kinase." J.Biol.Ch

米泽K.、横野K.、志井K.、小川W.、安藤A.、原K.、马场S.、镝木Y.、山本本田R.、桃村K