細胞の増殖・癌化におけるアダプター蛋白Nckの役割

接头蛋白Nck在细胞增殖和癌变中的作用

• 批准号: 07273244
• 负责人: 春日 雅人
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273244/
• 关键词: Nck; Nap-1; Hem

Nckは、ひとつのSH2ドメインと3つのSH3ドメインよりなる蛋白であり、Grb2と同様なadaptor蛋白と考えられている。Nckは多くの組織で発現が認められ、その過剰発現によりNIH3T3細胞や3Y1 rat fibroblastをトランスフォームすることが報告されている。さらにPDGF受容体やIRS-1のチロシン燐酸化部位にそのSH2ドメインを介してPDGF依存性あるいはインスリン依存性に結合することが報告されている。本研究ではこのNck蛋白がそのSH3ドメインを介してどのような蛋白と結合しているのかを明らかにした。すなわち、Nck蛋白のSH3ドメインをGST融合蛋白として大腸菌で発現し、その蛋白をグルタチオンセファロースに結合してアフィニティカラムを作製した。このカラムに、牛の脳の可溶化分画を吸着させたのち洗浄し、このカラムに結合した蛋白をSDS-PAGEで解析した。その結果、分子量125kDaのペプチドが見い出された。このペプチドをゲルより切り出し、そのアミノ酸配列を決定し、このペプチドのcDNAをクローニングした。その結果、この蛋白は未知の蛋白であることが明らかとなり、我々はNap-1(Nck associated protein-1)と命名した。このNap-1は既知の機能ドメインを持たない細胞質蛋白で、既に報告されているHem蛋白ファミリーとアミノ酸レベルでhomologyが認められた。このNap-1に対する抗体を作製して検討した所、Nap-1はin vitroでも細胞内でもNckと結合することが明らかとなったが、NckとNap-1が直接に結合しているという成績は得られなかった。今後、このNap-1がNckのどのような情報伝達に関与しているか明らかにしたい。

Nck, Nck has been reported to have multiple tissue findings, including NIH 3T3 cells and 3Y1 rat fibroblast. The PDGF receptor and IRS-1 phosphorylated site are reported to be PDGF-dependent. In this study, the Nck protein was isolated from the SH3 protein. GST-like proteins are produced in E. coli and are produced in E. coli. The protein was analyzed by SDS-PAGE. The molecular weight of 125kDa was found in the sample. This selection requires a selection process, a selection process, and a selection process. Nap-1(Nck associated protein-1) is a protein that is not known. Nap-1 is known for its function as a cytoplasmic protein, a protein that is reported to be present in the cytoplasm, and a protein that is known to be present in the cytoplasm. The Nap-1 antibody is produced in vitro and bound directly to the cell. In the future, the Nap-1 will be sent to the information center.

项目成果

Ando, A., et al.: "A complex of GRB2-dynamin binds to tyrosine-phosphorylated insulin receptor substrate-1 after insulin treatment." EMBO J.13. 3033-3038 (1994)

Ando, A. 等人：“胰岛素治疗后，GRB2-动力复合物与酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物 1 结合。”

Noguchi, T., et al.: "Role of SH-PTP2, a protein-tyrosine phosphatase with Src homology-2 domains, in insulin -stimulated Ras activation." Mol. Cell. Biol.14. 6674-6682 (1994)

Noguchi, T. 等人：“SH-PTP2（一种具有 Src 同源 2 结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶）在胰岛素刺激的 Ras 激活中的作用。”

Uchida.T.,et al.: "Insulin stimulates the phosphorylation of Tyr^<538> and the catalytic activi of PTPIC, a protein tyrosine phosphatase with Src-Homology-2 domains." J.Biol.Chem.269. 12220-12228 (1994)

Uchida.T. 等人：“胰岛素刺激 Tyr^<538> 的磷酸化和 PTPIC（一种具有 Src-Homology-2 结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶）的催化活性。”

Hara, K., et al.: "Phosphoinositide 3-kinase activity is required for insulin-stimulated glucose transport but not for ras activation in CHO cells." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91. 7415-7419 (1994)

Hara, K. 等人：“磷酸肌醇 3-激酶活性是胰岛素刺激的葡萄糖转运所必需的，但 CHO 细胞中的 ras 激活则不需要。”

Sakaue, M., et al.: "A dominant-negative mutant of mSoS1 inhibits insulin-induced ras activation and reveals ras-dependent and-independent insulin signaling pathways." Mol. Cell. Biol.15. 379-388 (1995)

Sakaue, M. 等人：“mSoS1 的显性失活突变体可抑制胰岛素诱导的 ras 激活，并揭示 ras 依赖性和独立性胰岛素信号传导通路。”