リンパ球増殖性疾患の悪性化におけるIL-6と癌遺伝子変異

IL-6和癌基因突变在淋巴增殖性疾病恶性进展中的作用

• 批准号: 04152078
• 负责人: 吉崎 和幸
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152078/
• 关键词: リンパ球増殖性疾患; Castleman's disease; IL-6; bcl-2; 抗bcl-2抗体

1.Castleman's diseaseリンパ節細胞の細胞株の樹立Castleman's disease(C.D.)患者の腫大リンパ節をin vitroで長期培養し株化に成功した。5種の細胞株を得てIL-6の発現をみたところ、2株にその上清中にIL-6を検出した。しかしいずれもIL-6を加えても増殖を示さなかった。2.bcl-2蛋白に対するモノクローナル抗体の作製C.D.患者リンパ節細胞の中にbcl-2癌遺伝子のt(14;18)translocationがみられ、しかも異なる転座様式が1患者で存在することを既に見出している。そこでbcl-2蛋白の発現を検索するため、bcl-2蛋白に対するモノクローナル抗体の作製を行った。抗原に用いたbcl-2蛋白は、bcl-2α(26Kd)とbcl-2γ(24Kd)の混合でβ-Galとのfusion proteinである。なおこれらは本学バイオメディカル教育研究センターの辻本教授より供与された。当初15-20μgを半月毎に3回FCA,IFAと共に注入して作製したところ、全てaffinityの低いIgMクラスの抗体しか得られなかった。次に同量を約1〜2ケ月毎に免疫した結果、affinityの高いIgGクラスのモノクローナル抗体が得られた。2回のfusionにて29のクローンを得たがIgG_1は4,IgG_<2a>は12,IgG_<2b>は8個認めた。抗体判定はPOD結合wellにbcl-2抗原(100ng/ml,50μl)を付着させ細胞培養上清を加えよく混合した後、抗IgG抗体を反応させるElias法を用いた。更に特異性をみるため、bcl-2抗原を泳動後、培養上清によるWesternblot法を行った。結局4回の細胞融合を行い全部で273個の陽性クローン(IgM133,IgG136)を得たが樹立クローンは41個であった。bcl-2に対する良い抗体はKorsmeyerらの抗体のみである。今回我々は抗体価の高いマウスモノクローナル抗体(IgGクラス)を得ることができた。これらを用いてbcl-2蛋白の発現機構が解析できると思われる。

1.Castleman's diseaseリ パ パ segment cells <s:1> cell line <e:1> establishment in a Castleman's disease(C.D.) patient with enlarged pluces リ パ パ segments をin vitroで long-term culture of the strain に successful た た. In five <s:1> cell lines を, てIL-6 samples were found in をみたと をみたと ろ ろ, and in the supernatant of two にそ samples, にIL-6を検 was found in た. <s:1> ずれ ずれ ずれ IL-6を plus えて えて enrichment を shows さな った った った. 2. The BCL - 2 protein に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル C.D. patients the antibody の cropping リ ン パ ganglion cells in the の に traces of the BCL - 2 carcinoma 伝 son の t (14, 18) translocation が み ら れ, し か も different な る planning a others in type 1 patients exist で す が る こ と を に see both the し て い る. そ こ で BCL - 2 protein の 発 now を 検 cable す る た め, BCL - 2 protein に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル を line the antibody の cropping っ た. Antigen に with い た BCL - 2 protein は, BCL - 2 alpha (26 kd) と BCL - 2 gamma (24 kd) の で beta Gal と の fusion protein で あ る. Youdaoplaceholder0 なお れら れら れら バ this school バ メディカ メディカ セ educational research セ タ タ タ タ タ なお Professor Tsujimoto よ なお contributed to された. Had 15 to 20 mu g を half their に 3 back FCA, IFA と altogether に injection し て cropping し た と こ ろ, whole て affinity の low い IgM ク ラ ス の antibody し か must ら れ な か っ た. Time に commensuration を about 1 ~ 2 ケ month their に immune し た results, affinity, high の い IgG ク ラ ス の モ ノ ク ロ ー ナ が ル antibodies to ら れ た. 2 back の fusion に て 29 の ク ロ ー ン を have た が IgG_1 は 4, IgG_ < 2 > a は 12, IgG_ < b > 2 は eight recognize め た. Antibodies to determine は POD combining well に BCL - 2 antigen (100 ng/ml, 50 mu l) pay the さ を せ cell culture supernatant を plus え よ く mixed し た after を, IgG antibody against 応 さ せ る を Elias method with い た. More に specific をみるため, bcl-2 antigen を after swimming, culture supernatant によるWesternblot を for った. All 4 back end の cell fusion line を い で 273 の positive ク ロ ー ン (IgM133, IgG136) を た が set ク ロ ー ン は 41 で あ っ た. bcl-2に against する good <s:1> antibody する Korsmeyerら <s:1> antibody みである みである. Today to my 々 は antibody 価 の high い マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (IgG ク ラ ス) を must る こ と が で き た. Youdaoplaceholder2 れらを using the <s:1> てbcl-2 protein, the mechanism of discovery が analysis で ると ると ると thought われる.

项目成果

K.Yoshizaki,T.Kuritani,T.Kishimoto: "Interleukin-6 in autoimmune disorders" Seminats in Immunology. 4. 155-166 (1992)

K.Yoshizaki、T.Kuritani、T.Kishimoto：“自身免疫性疾病中的白细胞介素 6”免疫学研讨会。

K.Yoshizaki,N.Nishimoto,K.Kondo,H.Tagoh,T.Kuritani.: "Role of interleukin 6 in pathogenesis of B lymphocytes-proliferative diseases." Role of Cytokines in Human Neoplastic Cell Growth,Gann Monograph on Cancer Research. 40. (1993)

K.Yoshizaki、N.Nishimoto、K.Kondo、H.Tagoh、T.Kuritani.：“白细胞介素 6 在 B 淋巴细胞增殖性疾病发病机制中的作用。”