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時間分解蛍光イムノアッセイによる高感度・広測定域サイトカイン測定系の開発

使用时间分辨荧光免疫分析开发高灵敏度、宽测量范围的细胞因子测量系统

基本信息

批准号：
03557027
负责人：
吉崎和幸
金额：
$ 6.14万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03557027/
关键词：
DELFIA immunoassay cytokines Interleukin6 interleuken 6 receptor TNFα IL-8 IL-5 Fluoro immunoassay Europium IL-6 TNF-α

项目摘要

昨年本計画により、Dissociation enhanced lanthanide fluoroimmuno-assay(DELFIA)によるサイトカイン測定系を確立するため、サイトカインに対する抗体へのEuropium標識の条件を確立した。またサイトカインに対する数種の抗体から感度の高い測定系が確立される相応の抗体を選択しTNFα及びIL-6の測定系を確立した。本年度は以下の研究を行った。1.IL-5,可溶性IL-6receptor(sIL-6R)測定系の確立IL-5測定系確立のため高津はモノクローナル抗体NC-17を作製した。ウサギ抗IL-5抗体との間で系を確立した。しかし本系の場合は500pg/ml以上でなければ測定不能で感度が悪く、新たな抗体を要すると思われた。可溶性のIL-6レセプター(sIL-6R)の測定系は抗原認識部位の異なる2種のモノクローナル抗体を用いて確立し10pg/ml以上の感度が得られた。なお測定範囲はいずれも10^4の広測定域が得られた。2.血清材料測定系の確立TNFα,IL-8の血清レベルでの測定系を確立した。sIL-6Rは10倍以上希釈した血清を用いるならばスタンダードカーブに平行に希釈曲線を描くことができ、血清レベルでも測定することが確かめられた。3.サイトカイン、sIL-6Rの生理・病態意義糸球体腎炎はメサンギウム細胞の増殖、上皮細胞の増殖等がみられる。この発症機序にIL-1,IL-6,IL-4等の関与が考えられる。我々は既にメサンギウム細胞の増殖にIL-6がautocrineとして作用することを示した。今回IL-1によって上皮細胞がその増殖を抑制すること、分化を促しIL-6,IL-8等の産生が生じることを見出した。このことは急性進行性腎炎の場合の半月体形成の機作を裏付けるものと思われる。sIL-6Rは血清中に約50ng/ml存在する(IL-6の100倍)。この分泌細胞は不明であるが、末梢顆粒球数と関連性を見出し、現在顆粒球系細胞からの産生を検討している。

In this project, the conditions for the identification of antibodies with Europium were established by the Disassociation Enhanced Lanthanide Fluoroimmuno-assay(DELFIA). The high sensitivity assay for several antibodies was established, and the assay for TNFα and IL-6 was established This year, the following research was conducted. 1. Establishment of an IL-5, soluble IL-6receptor(sIL-6R) assay system Takitsu Wasumokuro Naroul antibody NC-17 was developed to establish an IL-5 assay system. The anti-IL-5 antibody and its related system were established. In this case, the sensitivity of the assay cannot be determined above 500pg/ml, and the antibody is required. Soluble IL-6 receptor (sIL-6R) was determined by using two different antigen-recognizing sites and two different antigen-recognizing antibodies to establish a sensitivity of more than 10pg/ml. The measurement range is 10^4 and the measurement range is 10^4. 2. Establishment of serum TNFα,IL-8 and serum TNF α assay system. sIL-6R is more than 10 times higher than the serum level. 3. Physiological and pathological significance of sIL-6R and sIL-6R in glomerulonephritis. IL-1,IL-6,IL-4, etc. We have shown that IL-6 plays an important role in cell proliferation. IL-1 inhibits the proliferation and differentiation of epithelial cells and promotes the production of IL-6 and IL-8. The mechanism of meniscus formation in acute progressive nephritis sIL-6R was present at about 50ng/ml in serum (100 fold higher than IL-6). The number and relationship of these secretory cells are unknown, and the number and relationship of these peripheral granulocytes are discussed.