ファージライブラリーを用いたIL-6阻害ヒト抗体および低分子癌抑制分子の開発

使用噬菌体文库开发 IL-6 抑制性人类抗体和小分子癌症抑制分子

• 批准号: 15025245
• 负责人: 吉崎 和幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025245/
• 关键词: 癌増殖抑制; ファージライブラリー; single chain fragment variant; 小分子ヒト抗体; ペプチド阻害剤; IL-6阻害

サイトカインは腫瘍細胞の増殖因子であり、その機能阻害による癌の治療が期待される。抗TNFα抗体や抗IL-6受容体抗体を用いた治療はこのような知見から非常に有効な治療手段といえる。しかし、これらの抗体は高分子であるため投与方法に制限が生じる。そこで、我々はより利便性の高い阻害剤の開発を目指している。まず、ヒト抗体を用いたサイトカイン阻害剤としてsingle chain fragment variant(scFv:H鎖とL鎖の可変部のみの遺伝子を結合させた異型抗体)を導入した抗体ファージライブラリーを用いてIL-6に結合するscFvの発現クローンを得る方法を確立した。これらのscFvからIL-6依存性細胞増殖抑制能を持つクローンを選別した。つぎに無差別配列した7アミノ酸より成るペプチドを表現したM13ファージライブラリーを用いてリコンビナントIL-6をコートしたプレートにまき、IL-6結合ファージクローンを得た。IL-6特異結合クローンを選択するため、IL-6、ヒトIg、ヒトアルブミン、BSA、またはゼラチンをコートしたディッシュを用いて、得られた18クローンを反応させ、ビオチン化抗M13抗体にて反応させた。その結果、IL-6に特異的に結合するクローンを3-5種得、さらに数を増やすため2-3回同法を行った。その後IL-6依存増殖する細胞の増殖阻害を行い数種のIL-6増殖抑制クローンを得た。今後IL-6の特異性、あるいはペプチドによる増殖抑制を検討する。

The growth factors of tumor cells are expected to inhibit the function of tumor cells Anti-TNF α antibody and anti-IL-6 receptor antibody are used to treat the disease. Antibodies are produced by methods and methods. In addition, we have developed a new type of high resistance agent for convenience. A method for the development of scFv by binding to IL-6 was established. These scFv's inhibit IL-6-dependent cell proliferation and can be selectively selected. In addition, the IL-6 gene expression was determined by the combination of IL-6 and IL-7. IL-6 specifically binds to the anti-M13 antibody in the presence of IL-6, Ig, BSA, and anti-M13 antibodies. The results showed that IL-6 specific binding was 3-5 species, and the number of IL-6 binding was 2-3. The proliferation inhibition of IL-6-dependent cells was observed in several IL-6-dependent cells. In the future, IL-6 specificity and growth inhibition will be discussed.

项目成果

Okada S, et al.: "Blockade of interleukin-6 receptor suppresses reactive astrogliosis and ameliorates functional recovery in experimental spinal cord injury."J.Neurosci.Res.. (in press). (2004)

Okada S 等人：“阻断白细胞介素 6 受体可抑制反应性星形胶质细胞增生并改善实验性脊髓损伤中的功能恢复。”J.Neurosci.Res..（出版中）。

Nishimoto N, et al.: "Toxicity, pharmacokinetics, and dose finding study of repetitive treatment with humanized anti-interleukin 6 receptor antibody, MRA, in rheumatoid arthritis -a phase I/II clinical study of MRA for rheumatoid arthritis in Japan-."J.Rh

Nishimoto N 等人：“人源化抗白细胞介素 6 受体抗体 MRA 重复治疗类风湿性关节炎的毒性、药代动力学和剂量探索研究——日本 MRA 治疗类风湿性关节炎的 I/II 期临床研究。

Ohno S, et al.: "Yoshizaki K, Inaba G.Efficacy, safety, and pharmacokinetics of multiple administration of infliximab in clinical study on Behcet's disease with refractory uveoretinitis."J.Rheum.. (in press). (2004)

Ohno S 等人：“Yoshizaki K、Inaba G.多次给药英夫利昔单抗在白塞病伴难治性葡萄膜视网膜炎临床研究中的功效、安全性和药代动力学。”J.Rheum..（出版中）。

Nakahara H, et al.: "Anti-interleukin-6 receptor antibody therapy reduces vascular endotherlial growth factor (VEGF) production in rheumatoid arthritis."Arthritis Rheum. 48. 1521-1529 (2003)

Nakahara H 等人：“抗白细胞介素 6 受体抗体疗法可减少类风湿性关节炎中血管内皮生长因子 (VEGF) 的产生。”关节炎大黄。

Ito A, et al.: "A pilot randomized trial of a human anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody in active Crohn's disease."Gastroenterology. (in press). (2004)

Ito A 等人：“人类抗白细胞介素 6 受体单克隆抗体治疗活动性克罗恩病的随机试验。”胃肠病学。