Identifizierung, Charakterisierung und Isolierung von CpG-Oligodeoxynukleotid-bindenden Proteinen

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Bakterielle DNA und synthetische Oligodeoxynukleotide mit CpG-Motiven (CpG-ODN) wirken stimulierend und aktivierend auf Zellen des Immunsystems. Sie führen zur Sekretion von Zytokinen und vermitteln Schutz gegen Infektionen. Über die molekularen Mechanismen der Stimulation mit DNA ist wenig bekannt, und ein postulierter CpG-DNA-spezifischer Rezeptor konnte bis heute nicht identifiziert werden.Ziel des Projektes ist die Identifizierung des CpG-DNA-spezifischen Rezeptors durch chromatographische Aufreinigung des Proteins, durch Erzeugung von spezifischen Antikörpern und durch Immunpräzipitation des Rezeptors als Komplex mit dem Adaptorprotein Myd88. Komplementierend zum bioschemischen Ansatz soll eine cDNA Expressions-Genbank aus murinen Makrophagen transient in 293T-Zellen transfiziert werden. CpG-ODN Rezeptor-positive 293T-Zellen werden nach Stimulation mit CpG-ODN über die Induktion eines NFkB-abhängigen Rezeptorkonstruktes identifiziert und die cDNA isoliert.Die Identifizierung des CpG-ODN-Rezeptors liefert die Grundlage für ein besseres Verständnis des molekularen Mechanismus der CpG-ODN Wirkung. Sie ermöglicht, die Interaktion zwischen Ligand und Rezeptor genau zu untersuchen und gezielt zu manipulieren.