DNAプローブクロマトグラフィーによるがん遺伝子のDNA診断法の開発

开发使用DNA探针层析的癌症基因DNA诊断方法

• 批准号: 05152039
• 负责人: 陶山 明
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152039/
• 关键词: DNAプローブ; クロマトグラフィー; がん遺伝子; 診断法; PCR

DNAプローブクロマトグラフィー(DPC)は、合成DNAオリゴヌクレオチドを末端で支持体に固定したカラムを用いて温度勾配により核酸サンプルを塩基配列に応じて溶出させる高性能アフィニティクロマトグラフィーである。30分という短い時間で、僅か一塩基だけ塩基配列が異なるサンプルを分離することが出来る。本研究ではこのDPCを用いてがん遺伝子をDNAの塩基配列のレベルで診断する方法の開発を行ない、平成5年度は以下の成果を得た。1.オンコジーンN-rasの61番目のアミノ酸置換を引き起こす点突然変異の系列を利用してミスマッチの種類と識別精度との関係を決定した。DNA二重らせん分子の対称性を考慮すると、一塩基ミスマッチの種類は8種類ある。N-rasの61番目のアミノ酸がGln(正常)、Pro、Leu、Arg(いずれも異常)に対応する塩基配列をもつDNAを識別する4種類のプローブと、各々に対応する20塩基長のオリゴヌクレオチドとを用いて、DPCの溶出温度の8種類の一塩基ミスマッチに対する依存性を決定した。2.DPCでオンコジーンN-rasの61番目のアミノ酸置換を引き起こす点突然変異の診断が出来ることを示した。正常なGlnをコードする塩基配列と相補的なプローブを固定化したカラムを用いて、正常および異常なアミノ酸に対応する塩基配列をもつサンプルの混合物のDPC行なったところ、各々がきれいに分離されることが示された。3.DPCとPCRとを組み合せてDNA診断を行う際に使用するDNAプローブの最適塩基配列、サンプルDNAからPCR増幅断片をつくる際に使用するPCRプライマーの最適塩基配列を設計するためのソフトウェアを開発した。

DNA

项目成果

陶山明: "DNAプローブクロマトグラフィーによる単変異の高速・高分解能解析" 臨床分子生物学. (発表予定). (1994)

Akira Suyama：“通过 DNA 探针色谱法对单突变进行快速和高分辨率分析”《临床分子生物学》（演示文稿已安排）（1994 年）。

陶山明,土屋淳: "DNAプローブクロマトグラフィーによる塩基配列の高速・高分解能探査" 熱測定. (発表予定). (1994)

Akira Suyama、Jun Tsuchiya：“通过 DNA 探针色谱法对碱基序列​​进行高速、高分辨率探索”热测量（演示文稿已安排）（1994 年）。

Akira Suyama et al: "Single-base mismatch detection by DNA probe chromatography" J.Chromatogr.(発表予定). (1994)

Akira Suyama 等人：“通过 DNA 探针色谱法检测单碱基错配”J.Chromatogr.（待提交）。