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日周リズムからみたラット肝組織におけるシステインプロテアーゼmRNAの発現と局在

从昼夜节律角度观察大鼠肝组织中半胱氨酸蛋白酶mRNA的表达及定位

基本信息

批准号：
05770017
负责人：
和栗聡
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リソゾームの代表的なシステインプロテアーゼとして知られるカテプシンB、H、Lの発現調節を検索する目的で、In situ hybridization法およびNorthern blotting法を用い、ラット肝組織中におけるこれら酵素mRNAの日周リズムの解析を試みた。1.Northern blotting:プローブとして、ジゴキシゲニン標識したリボプローブ、および^<32>P標識したcDNAプローブを用い、まず予備実験として16時(明期の後期:タンパクレベルで最も発現が高い時間)のラット肝RNAについて解析した。その結果、各酵素に対応したRNAが検出されたが、ジゴキシゲニン標識を用いた方がバックグランドが高かったため、^<32>P標識したcDNAプローブを用いて日周リズムを解析した。24時間を6時点に分けて比較した結果、各酵素のmRNAは16時にピークとなるリズムを示したが、有意差は見られなかった。これはクッパー細胞におけるこれら酵素の発現が非常に高いためと思われる。そこでIn situ hybridization法にて肝細胞のみの発現を検索した。2.In situ hybridization:プローブは実験の簡易性という点からジゴキシゲニン標識のリボプローブを使用した。その結果、主に肝細胞及びクッパー細胞に各酵素mRNAの陽性反応が見られ、それはクッパー細胞により強かった。しかし、肝細胞の反応を画像解析にて検索したところ、肝小葉内での分布に差は見られず、また日周リズムの解析でも、明瞭なリズムが見られなかった。現段階で、ジゴキシゲニン標識のリボプローブでは感度が低いことも考えられるため、現在^<35>Sで標識したプローブを用いて解析中である。

The aim of this study was to detect the expression of protein B, protein H and protein L In liver tissue by situ hybridization and Northern blotting. 1. Northern blotting: <32>RNA analysis at 16 o'clock (late Ming period: highest development time). The results of the enzyme analysis were as follows<32>: 24 hours at 6 o'clock to compare the results, the mRNA of each enzyme at 16 o'clock to show the difference The expression of enzymes is very high. In situ hybridization is used to detect the development of hepatocytes. 2. In situ hybridization: the simplicity of the application of the logo The results showed that the positive reaction of each enzyme mRNA in liver cells and liver cells was strong, and the positive reaction in liver cells was strong. The analysis of liver cell anti-tumor images shows that the distribution of liver cells in the liver lobule is different from that in the liver. In the current stage, the number of marks is changed from low to high. In the current stage, the number of marks is changed from low to high. In the current stage, the number of marks is changed from high to low. In the current stage, the number of marks is changed from high to low<35>.