GH_4C_1細胞で見られたオートファジ-の解析とユビキチンの生理機能について

GH_4C_1细胞自噬及泛素生理功能分析

• 批准号: 06770017
• 负责人: 和栗 聡
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770017/
• 关键词: GH_4C_1細胞; オートファジ-; ユビキチン; 局在; 免疫電顕法

(1)免疫組織化学によるオートファゴゾームの生成機序の解析オートファジ-を誘導したGH4C1細胞を、凍結超薄切片上での免疫電顕法にて解析した。カテプシンB、H、L、および1gp120に対する抗体でリソゾームを標識したところ、リソゾーム自身が細胞質、分泌顆粒、残余小体、などを取り込む像が多数見られた。このことは、この細胞に見られるオートファゴソームが、飢餓時の肝臓に見られるようなマクロオートファジ-(小胞体による包み込み)ではなく、ミクロオートファジ-(リソゾームによる食べ込み)により生成されることを示唆する。(2)ユビキチンの局在共焦点レーザー顕微鏡を用いた蛍光抗体法と免疫電顕法を用いてこの細胞におけるユビキチンの局在を検索したところ、核、細胞質、リソゾーム、および空胞にユビキチンの免疫反応が認められた。特に空胞内では電子密度の高い顆粒の表面に、強いユビキチンの免疫反応が認められたこと、またミクロオートファジ-によって取り込まれるオルガネラの膜表面や残余小体内の膜成分上にも認められたことより、ユビキチンがミクロオートファジ-、あるいはオートファゴゾームの成熟過程に何らかの役割を持つことが示唆される。一方、パーコールを用いた密度勾配遠心により細胞分画を得、ウエスタンブロットによりユビキチンを解析したところ、リソゾームおよび細胞質分画に遊離型のユビキチンが認められた。また、僅かであるが膜分画(まだ特定していない)には、タンパクに結合したユビキチンと思われる高分子量のバンドも見られた。現在、細胞分画中のオルガネラを免疫電顕で解析する手法を確立している過程である。

(1)Immunohistochemical analysis of the molecular mechanism of growth in GH4C1 cells and frozen sections The antibody is identified by B, H, L, and 1gp120, and most of the antibodies are identified by cytoplasm, secretory granules, and residual bodies This is the case when the cells are in the middle of the day, when they are hungry, when they are hungry. (2)The method of immunoelectrochemistry is used to detect the immune response of the cells in the nucleus, cytoplasm, and space. In particular, the surface of particles with high electron density in the empty cell, the immune reaction of the strong electron density, the immune reaction, the The density of the cells in the center of the cell is determined by the number of cells in the center of the cell. The film is divided into two parts, namely, the first part and the second part, and the third part is divided into three parts. Now, the cell sorting process is established.

项目成果

Hiroshi Tomomasa: "Lysosomal cysteine proteinases in rat epididymis." The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 42. 417-425 (1994)

Hiroshi Tomomasa：“大鼠附睾中的溶酶体半胱氨酸蛋白酶。”

Yasuo Uchiyama: "Cell and tissue distribution of lysosomal cysteine proteinases,cathepsins B,H,and L,and their biological roles." Acta Histochemica et Cytochemica. 27. 351-372 (1994)

Yasuo Uchiyama：“溶酶体半胱氨酸蛋白酶、组织蛋白酶 B、H 和 L 的细胞和组织分布及其生物学作用。”