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カテプシンD欠損が中枢神経細胞の機能に与える影響

组织蛋白酶 D 缺乏对中枢神经细胞功能的影响

基本信息

批准号：
13210089
负责人：
和栗聡
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カテプシンD(CD)は神経性セロイドリポフスチノーシス(NCL)の動物モデルと考えられる。同欠損マウスで認められる神経変性の原因を明らかにする目的で、培養小脳顆粒細胞を用いた解析を行った。9日齢マウス脳より調整した小脳顆粒細胞を4〜7日間培養し、位相差顕微鏡および抗MAP2抗体、抗tau抗体を用いた免疫染色法で観察した結果、神経突起の伸長やネットワーク形成に正常細胞との差は認められなかった。しかし、細胞体には正常細胞では認められないsubunit cの免疫反応が認められ、またリソソーム膜蛋白であるlamp 1/lamp 2の免疫反応も増加していた。さらに電子顕微鏡観察では、細胞体および神経突起内に高電子密度の物質を有するオートファゴゾームあるいはリソゾーム/エンドゾーム様構造物が蓄積しており、そのいくつかは腫瘤様構造物となって神経突起を内側より圧迫していた。以上の結果は、同培養細胞系においてもNCL様病態を摸倣できることを示しており、突起内の巨大リソゾーム/エンドゾーム様構造物が本病態に関与している可能性を示唆する。次にCD欠損細胞が細胞死刺激に対して脆弱であるかどうかをMTTアッセイにより解析した。血清除去による細胞死誘導およびグルタミン酸投与による興奮毒性刺激においては、CD+/-とCD-/-との間で生存活性に有意な差は認められなかったが、naphthazarin投与による酸化ストレスに対してはCD-/-細胞の生存活性がCD+/-に比してやや高かった。これら結果は、個々の細胞の生存活性のみでCD欠損マウスに認められる神経変性機序を説明することは困難であることを示し、一方では酸化ストレスで引き起こされる細胞死過程にカテプシンDが何らかの役割を有していることを示唆する。

カテプシンD(CD)は神経性セロイドリポフスチノーシス(NCL)のAnimal モデルと卡えられる. In the same way, the cause and purpose of the defective nature of the disease can be identified, and the culture of small granulosa cells can be analyzed and performed. On the 9th day, the microorganism granulosa cells were adjusted and cultured between 4 and 7 days, and phase contrast microscopy was performed on anti-MAP2 antibodies and anti-tau antibodies. The results of the body's immunostaining method were used to observe the results, and the elongation of the nerve protrusions and the formation of normal cells were confirmed.しかし、Cell body にはNormal cell ではcognize められないsubunit cのimmune reaction がcognize められ、またリソソームmembrane protein であるlamp 1/lamp 2. The immune response is increased.さらにElectronic microscope observation では, high electron density material in the cell body および神経 protrusion するオートファゴゾームあるいはリソゾーム/エンドゾーム様structural storage しており、そのいくつかThe inner side of the tumor structure is compressed and compressed. The above results show that the same cultured cell line NCL様pathological disease できることをshow しておりThe huge リソゾーム/エンドゾーム様 structure in the inside is a sign of the disease and the possibility of it. Sub-CD damage cells, cell death stimulation, fragile cells, MTT analysis, etc. Blood removal, cell death induction, およびグルタミン acid administration, excitotoxic stimulation, による, においては, CD+/-, とCD-/-, との间でsurvival activity, なdifference, recognition めThe survival activity of られなかったが and naphthazarin acidified ストレスに対してはCD-/- cells was higher than that of してやや.これら Result, survival activity of individual cells, CD deficiency, マウスにidentification, められる神経変性 promoted mechanism, explanation, することはdifficulty, であることThe process of cell death caused by the acidification of acidificationにカテプシンDが何らかのservice cut を有していることをshows instigation する.