ジフテリア毒素リセプター・アソシエ-ト蛋白質によるリセプター量上昇機構の解析

白喉毒素受体相关蛋白增加受体水平的机制分析

• 批准号: 05770202
• 负责人: 岩本 亮
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770202/
• 关键词: ジフテリア毒素; HB-EGF; DRAP27; CD9; 増殖因子

近年、ジフテリア毒素(DT)非感受性のマウスL細胞に毒素感受性を与える遺伝子の産物が、細胞増殖因子Heparin-binding EGF-like Growth Factor(HB-EGF)の膜結合型前駆体であることが報告された。しかしながらジフテリア毒素リセプター(DTR)がHB-EGFである直接の証拠は示されていない。HB-EGFの発現によってDTR遺伝子の発現が誘導される可能性もあるからである。そこでまず報告者らは、細胞増殖因子活性を持ったリコンビナントHB-EGFがDTと直接結合できること、抗HB-EGF抗体とDTをプローブに用いたウェスタンブロッティングにおいてどちらも同じ分子種を認識することなどから、膜結合型HB-EGFがDTRであることを直接証明した。また膜蛋白質DRAP27/CD9は、それ自身はDTと結合しないが、その発現によって、リセプターと細胞膜上でアソシエ-トし、毒素結合数及び細胞の毒素感受性を増加させることが、これまでの報告者らの研究から明らかとなっている。このメカニズムを明らかにするために、マウスL細胞にDTR/HB-EGF、DRAP27/CD9、又はその両方を発現させたところ、DTR/HB-EGFとDRAP27/CD9の両方を発現している細胞はDTRのみの場合に比べて、10倍以上の毒素結合量及び感受性を示したが、毒素とリセプターの結合におけるアフィニティーは全く差がなかった。また、DTR/HB-EGFのmRNA量にも全く差がみられなかった。さらに抗HB-EGF抗体の細胞表面への結合から、それぞれの細胞表面におけるDTR/HB-EGF分子の発現量は、DRAP27/CD9の有無で差はないことがわかった。これらのことからDRAP27/CD9は、HB-EGF分子とアソシエ-トすることで膜結合型HB-EGF分子の数そのものは増やさずに、DTRとして働く機能的なHB-EGFを“all or nothing"式に増やしていることがわかった。

In recent years, there have been reports on the non-sensitivity of toxin (DT) to L cells, the sensitivity of toxin to L cells, and the membrane-bound precursor of Heparin-binding EGF-like Growth Factor(HB-EGF). For example, if you are a child, you may be able to use the HB-EGF directly. The possibility of the occurrence of HB-EGF and the occurrence of DTR gene is discussed. The results showed that the activity of HB-EGF was higher than that of DTR, and the activity of HB-EGF was higher than that of DTR. The membrane protein DRAP27/CD9 was found to be self-binding to DT and to increase the number of toxin binding sites on cell membranes and the sensitivity of cells to toxins. DTR/HB-EGF, DRAP27/CD9, and DTR/HB-EGF are found in cells that bind more than 10 times as much toxin as DTR and are sensitive to DTR. The mRNA levels of DTR/HB-EGF were significantly different. The binding of anti-HB-EGF antibody to cell surface is different, and the expression of DTR/HB-EGF molecule is different, and the presence or absence of DRAP27/CD9 is different. The number of membrane-bound HB-EGF molecules in DRP27/CD9 is increasing, and DTR is increasing.