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ジフテリア感染モデルマウスの作製とその発症機構の解析

白喉感染模型小鼠的建立及其发病机制分析

基本信息

批准号：
13226060
负责人：
岩本亮
金额：
--
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ジフテリア心筋炎は重傷ジフテリアに合併し、発病後2〜3週目頃急性心不全に陥り死亡する重要な合併症である。しかしその発症メカニズムについては、それがジフテリア毒素(DT)の毒性によるものなのかどうかということをも含め、ほとんど解明されていない。ジフテリア心筋炎の発症機構の解明が遅れている大きな要因の一つは、適切なモデル動物を用いた感染実験系が確立されていないことである。申請者らはこれまでジフテリア毒素受容体(DTR)の研究を、DTの細胞内侵入機構とDTRの生理的機能の両面から行ってきており、DTRの実体が膜結合型増殖因子HB-EGFであることなどを明らかにしてきた。本研究の目的はマウスのDT非感受性(DT非結合性)を利用して、DTと結合できるヒト型DTR/HB-EGFを心臓特異的に発現するノックインマウスを作製し、これにDTを投与することによって、ジフテリア心筋炎を誘導するモデルマウス実験系を確立し、DTによる心筋炎発症機構を解明することである。今年度、申請者らは、HB-EGFの膜型から分泌型への転換機構の生理的重要性を調べるために、膜貫通部位を欠失した変異HB-EGFを発現するノックインマウスを作製し解析したところ、種々の組織の発生異常が認められた。これらの中で特に心臓において著しい心室肥厚が観察され、HB-EGFがマウスの心臓の生理機能に重要な役割を果たしていることを明らかにした(論文投稿中)。このことからもジフテリア心筋症が、ジフテリア毒素による心臓におけるHB-EGF機能阻害のために起こっている可能性が示唆される。そこでまず、ジフテリア発症モデルマウス作製のため、ヒト型HB-EGFをコードするコンディショナル・ターゲティングベクターの作製をおこなった。マウス型HB-EGF cDNAにDsRedをIRESで連結し、通常はマウス型HB-EGFがHB-EGFのネイティブ・プロモーターによって発現するようにしておき、組織特異的Creリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウスとの交配によってコンディショナルにマウス型HB-EGFを欠失させ、同時にヒト型HB-EGF(マウス型HB-EGFのEGFドメインのみをヒト型のEGFドメイン、即ちジフテリア毒素結合部位に変換したもの)がhrGFPと共に発現するように、ターゲティングベクターを構築する。Creによってヒト型HB-EGFが発現する部位は緑色蛍光によって判別する。これらがマウスHB-EGFゲノムDNAのExon1からExon6までをターゲットするように設計した。現在、このコンストラクトをマウスに導入中である。

Acute heart failure occurs 2 to 3 weeks after the onset of severe heart failure. The toxic properties of toxin (DT) include the following: The mechanism for the development of acute myocardial infarction is identified as a major cause of infection, and the appropriate animal infection system is established. The applicant is interested in studying the intracellular invasion mechanism of DT and the physiological function of DTR, and the actual body of DTR is membrane-bound growth factor HB-EGF. The purpose of this study was to utilize DT non-sensitivity (DT non-binding) of DT, to bind DT to DTR/HB-EGF and to control the development of cardiac-specific DTR/HB-EGF, to establish the mechanism for the development of cardiac-specific DTR/HB-EGF and to elucidate the mechanism for the development of cardiac-specific DTR/HB-EGF. In this year, the applicant has adjusted the physiological importance of HB-EGF membrane type, secretory type and metabolic mechanism, and identified the abnormality of HB-EGF membrane penetration site. This is especially true in the case of ventricular hypertrophy, which is an important physiological function of HB-EGF. The possibility of HB-EGF functional impairment is indicated by the presence of HB-EGF in the brain. For example, if you have a problem with HB-EGF, you may find that it's not a good idea. Type HB-EGF cDNA contains DsRed, which is linked to IRES, and is usually linked to type HB-EGF. Type HB-EGF is usually linked to type HB-EGF, and type HB-EGF is usually linked to type HB-EGF, and type HB-EGF is usually linked to type HB-EGF.(b) The expression of hEGF in the hEGF gene is similar to that of hEGF in the hEGF gene. Cre type HB-EGF occurs in green light. This is the design of HB-EGF, the DNA of Exon1 and Exon6. Now, this is the first time I've seen you.