ウイルス感染における抗原認識・抗体産生の分子機構-ヒトサイトメガロウイルスの中和に関与するエピトープと主要組織適合抗原との関連について-

病毒感染过程中抗原识别和抗体产生的分子机制 - 参与中和人巨细胞病毒的表位与主要组织相容性抗原之间的关系 -

• 批准号: 05770218
• 负责人: 綾田 稔
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770218/
• 关键词: ヒトサイトメガロウイルス; 主要組織適合抗原; B細胞エピトープ; 中和抗体

ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)の糖蛋白gBには中和に関与するエピトープがある。HCMV抗体陽性の血清を検索したところ、このエピトープに対する、抗体陰性例が多数認められた。しかしこの抗体陰性者より分離されたウイルスには変異が無いことから宿主要因の関与が示唆された。そこで、このエピトープに対する抗体産生の有無と主要組織適合抗原との関係を検討するために、系統の異なるマウスを用いて抗体産生能の差異を検討することを目的に実験を行った。大腸菌で発現させた融合蛋白を用いた以前の解析から、ヒトモノクローナル抗体(C23)で認識されるgBの中和に関与するエピトープは17個のアミノ酸からなる領域に含まれると推定された。そこで、この配列に相当するペプチド(NETIYNTTLKYGDVVGV)を合成した(純度約25%)。このペプチドをコートしたマイクロプレートを用いてELISAを行ったところ、C23抗体およびHCMV抗体陽性血清と反応することが確認され、その検出感度はウェスタンブロッティング法よりも優れていた。この合成ペプチドをH-2ハプロタイプの異なるマウス(C3H/HeJ,BALB/cA,C57BL/6J)にアジュバントと共に免疫した。免疫3週間後に血清を採取して、ウェスタンブロッティング法で抗体産生の有無を解析したが、何れの系統のマウスでも検出感度以下であった。今後この血清および二次刺激後の血清をELISAで検討する予定である。さらに、今後の検討課題として、免疫原として融合蛋白を用いたり、自然感染に近い様式で抗原を提示できると考えられるプラスミドのマウスへの直接導入も試みたい。

The sugar content of HCMV is very low. HCMV antibody-positive sera were detected in the majority of cases, and antibody-negative sera were detected in the majority of cases. The main reason for this is that the antibody is negative. The difference in antibody production between the two groups is discussed. E. coli fusion protein was found in the previous analysis, analysis and identification of gB neutralizing antibodies (C23), including 17 putative domains. The purity of NETIYNTTLKYGDVGV is about 25%. The detection of C23 antibody and HCMV antibody positive serum was confirmed by ELISA. The sensitivity of HCMV antibody was determined by ELISA. The combination of H-2,BALB/cA,C57BL/6J and C-3 is immune to disease. After 3 weeks of immunization, the serum was taken, and the antibody production was analyzed. In the future, the serum and serum after secondary stimulation will be determined by ELISA. In addition, future research topics include the use of immunogenic fusion proteins and the direct introduction of antigens into the device in a similar manner to natural infections.