歯周炎関連口腔細菌による炎症性シクロオキシゲナーゼ産生の解析

牙周炎相关口腔细菌产生炎性环氧合酶的分析

• 批准号: 05771482
• 负责人: 佐々木 実
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771482/
• 关键词: Porphylomonas gingivalis; Streptococcus anginosus; 炎症性シクロオキシゲナーゼ; マイトジェニックファクター; 歯周炎

歯周炎関連の口腔内細菌としてPorphylomonas gingivalis、Streptococcus anginosusの培養上清からヒト末梢血単核細胞(PBMC)を幼若化するマイトジェニックファクター(MF)を部分精製し、炎症性シクロオキシゲナーゼ(COX-2)mRNAの動態におよぼす影響をReverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)法で検討した。1.方法(1)MFの精製:P.gingivalis、S.anginosusの培養上清をDEAE-Sephacel、Sehadex G-100で分画し、部分精製した。これらの画分のうち、PBMCに対する幼若化能の強い画分をMFとして用いた。(2)COX-2 mRNAの検出:P.gingivalis、S.anginosusから得られたMFをPBMCあるいはヒト歯肉線維芽細胞(Gin-1)に加えて培養し、4時間後に細胞を集め、Acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform(AGPC)法で全RNAを抽出する。さらにこのRNAからcDNAを合成し、COX-2特異的プライマーを用いて、PCRを行い、アガロース電気泳動でCOX-2 mRNAを検出した。2.結果(1)P.gingivalis、S.anginosusの培養上清から得られたMFは、SDS-PAGEで3〜4本のタンパクバンドにまで精製した。(2)PBMCあるいはGin-1にこれらMFを(1〜2mug/ml)加えて培養すると、細胞内mRNAは対照(PBSコントロール)にくらべ、P.gingivalis、S.anginosusいずれのMFでも明らかにCOX-2 mRNAが増量していた。3.考察:以上の結果より、歯周炎関連細菌P.gingivalis、S.anginosusの培養上清にCOX-2を誘導する物質が存在し、歯周炎との関連が示唆された。

Oral bacteria associated with periodontitis include Porphylomonas gingivalis and Streptococcus anginosus culture supernatant peripheral blood monocytes (PBMC) するマイトジェニックファクター( MF)をPartially purified, inflammatory シクロオキシゲナーゼ(COX-2)mRNA dynamic におよぼすimpactをReverse The transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) method is used. 1. Method (1) Purification of MF: The culture supernatant of P.gingivalis and S.anginosus was separated and partially purified by DEAE-Sephacel and Sehadex G-100.これらの画分のうち, PBMC に対するYouruohua energy の强い画分をMF として用いた. (2) COX-2 mRNA release: P.gingivalis, S.anginosus, MF, PBMC, fibroblast fibroblast cells (Gin-1), cultured cells after 4 hours, Acid The guanidinium thiocyanate-phenolchloroform (AGPC) method is used to extract whole RNA.さらにこのRNAからcDNAをsynthesisし、COX-2 specific プライマーを useいて、PCRを行い、アガロースelectrophoresisでCOX-2 mRNAを検出した. 2. Results (1) The culture supernatant of P.gingivalis and S.anginosus was obtained by MF, and the SDS-PAGE 3~4 version was refined. (2) PBMC あるいはGin-1にこれらMFを (1~2mug/ml) plus えて culture すると, intracellular mRNA は対色 (P BSコントロール)にくらべ、P.gingivalis、S.anginosusいずれのMFでも明らかにCOX-2 The amount of mRNA increases. 3. Investigation: The above results indicate that the culture supernatant of P.gingivalis and S.anginosus-related bacteria and COX-2-inducing substances is present, and that there is no correlation between periostitis and peritonitis.