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歯周炎関連口腔細菌による炎症性シクロオキシゲナーゼ産生の解析

牙周炎相关口腔细菌产生炎性环氧合酶的分析

基本信息

批准号：
05771482
负责人：
佐々木実
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

歯周炎関連の口腔内細菌としてPorphylomonas gingivalis、Streptococcus anginosusの培養上清からヒト末梢血単核細胞(PBMC)を幼若化するマイトジェニックファクター(MF)を部分精製し、炎症性シクロオキシゲナーゼ(COX-2)mRNAの動態におよぼす影響をReverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)法で検討した。1.方法(1)MFの精製:P.gingivalis、S.anginosusの培養上清をDEAE-Sephacel、Sehadex G-100で分画し、部分精製した。これらの画分のうち、PBMCに対する幼若化能の強い画分をMFとして用いた。(2)COX-2 mRNAの検出:P.gingivalis、S.anginosusから得られたMFをPBMCあるいはヒト歯肉線維芽細胞(Gin-1)に加えて培養し、4時間後に細胞を集め、Acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform(AGPC)法で全RNAを抽出する。さらにこのRNAからcDNAを合成し、COX-2特異的プライマーを用いて、PCRを行い、アガロース電気泳動でCOX-2 mRNAを検出した。2.結果(1)P.gingivalis、S.anginosusの培養上清から得られたMFは、SDS-PAGEで3〜4本のタンパクバンドにまで精製した。(2)PBMCあるいはGin-1にこれらMFを(1〜2mug/ml)加えて培養すると、細胞内mRNAは対照(PBSコントロール)にくらべ、P.gingivalis、S.anginosusいずれのMFでも明らかにCOX-2 mRNAが増量していた。3.考察:以上の結果より、歯周炎関連細菌P.gingivalis、S.anginosusの培養上清にCOX-2を誘導する物質が存在し、歯周炎との関連が示唆された。

To investigate the effects of Reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR) on the dynamics of COX-2 mRNA in cultured supernatant peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of periodontitis associated oral bacteria, Porphylomonas gingivalis and Streptococcus anginosus. 1. Methods (1)MF purification:P.gingivalis, S.anginosus culture supernatant, DEAE-Sephacel, Sehadex G-100, separation, partial purification. This is the first time that we've seen this. (2)COX-2 mRNA expression: P. gingivalis, S.anginosus, MF, PBMC, Gin-1 cells, total RNA extraction by Acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform(AGPC) method. In addition, COX-2 mRNA was detected by PCR, DNA synthesis, COX-2 specific transcription and expression. 2. Results (1) The culture supernatant of P. gingivalis and S.anginosus was purified by MF and SDS-PAGE. (2) The expression of COX-2 mRNA in PBMC was increased by the addition of MF (1 ~ 2 ug/ml) and intracellular mRNA (PBS). 3. The results showed that COX-2-inducing substances existed in culture supernatant of P. gingivalis and S.anginosus, which were associated with periodontitis.