正常ヒト唾液腺細胞の不死化に関する研究

正常人唾液腺细胞永生化的研究

• 批准号: 05771790
• 负责人: 板東 高志
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771790/
• 关键词: 唾液腺細胞; 不死化; SV40 DNA

本研究にあたり、正常唾液腺組織は顎下腺体内唾石症の患者に対する唾液腺摘出術時に得られた顎下腺を用いた。なお、この唾液腺組織は病理学的検索より正常組織であることが明らかにされた。手術時に得られた顎下腺組織を無菌的に採取し、あらかじめI型コラーゲンにてコートされた培養皿上に静置させ、無血清培地にて培養した。上記の条件下で培養した場合、上皮細胞のみの良好な増殖が得られたので、これらの細胞にSV40 ori-mutant DNAをリポフェクチン法を用いて、トランスフェクション行った。2,3週後、旺盛な細胞増殖を示すコロニーが出現したため、1つのコロニーをクローニングした。クローニングされた細胞をプラスチック皿上で培養した際、形態学的相違を示す4種類の細胞が認められたため、更にクローニングを行った。すなわち、多角形、紡錘形及び扁平な形態を示す細胞はそれぞれ導管上皮、筋上皮及び扁平上皮細胞に似ていた。また、多数の分泌顆粒を有する多角細胞は腺房細胞に類似していた。超微構造学的並びに特異的細胞マーカーの検索より、それぞれの細胞クローンは導管上皮、筋上皮および腺房細胞に極めて近似した細胞クローンであることが明らかとなった。なお、これらの細胞クローンにおけるSV40 DNAの組み込みと発現に関してSouthern blot及び間接蛍光抗体法により検索したところ、組み込み、発現ともに確認された。軟寒天中でのコロニー形成能及びヌードマウス背部皮下での腫瘍原性はともに認められなかった。以上の研究結果より、ヒト唾液腺組織を構成する4種類の細胞クローンがin vitroにおいて樹立され、これらの細胞クローンは非腫瘍原性であることが明らかとなった。すなわち、本研究の目的である正常ヒト唾液腺細胞の不死化は達成されたものと考える。

In this study, the salivary glands of patients with sialolithiasis in normal salivary gland tissues and normal salivary gland tissues were used during the extraction of salivary glands. The histology of salivary glands: normal tissue, normal tissue, normal tissue and normal tissue. The sterilized tissue of the subglandular tissue was obtained by hand, and the incubator was placed on the petri dish and serum-free culture plate. Under the above conditions, the epithelial cells were closed, the epithelial cells were well colonized, the cells were SV40 ori-mutant DNA, the cells were closed, and the method was used. 2After 3 years of age, the exuberant cell colonization showed that there was a bug, and that there was a bug, and that there was a bug. In order to improve the quality of the cells, the difference between the cells and the morphology on the plate shows that the four kinds of cells are not suitable for each other. The shape of the tube, tendon and flat epithelium is similar to that of the tube epithelium, tendon epithelium and flat epithelium. Most secretory granules have polygonal cells and the type of glandular atrium is similar to that of ovaries. The ultrastructure and special characteristics of the cells are very important. The cells are closely related to the epithelium of the tubes, the epithelium of the tendons, the glandular atrium and the cells of the atrium. In this paper, we use the method of photoantibody to make sure that the SV40 DNA is detected, and the photoantibody method is used to make sure that the Southern blot is detected, and the photoantibody method is used to make sure that it is correct. In the cold weather, the formation energy and the subcutaneous nature of the back are not affected. According to the results of the above study, the salivary gland tissues of human salivary glands were divided into four types of cells, namely, the normal cells, the in vitro cells, the normal cells, the non-pathogenic salivary glands, the normal salivary glands, the salivary glands and the salivary glands. The purpose of this study is to make a study of the immortalization of salivary gland cells.

项目成果

Masayuki,Azuma: "Enhanced proteolytic activity is responsible for the aberrant morphogenetic development of SV40-immortalized normal human salivary land cells grown on basement membrane components." Laboratory Investigation. (In press). (1994)

Masayuki, Azuma：“增强的蛋白水解活性是在基底膜成分上生长的 SV40 永生化正常人类唾液陆地细胞异常形态发育的原因。”

Masayuki,Azuma: "Immortalization of normal human salivary gland cells with duct-myoepithelial,acinar,or squamous phenotype by transfection with SV40 ori-mutant deoxyritonucleic acid." Laboratory Investigation. 69. 24-42 (1993)

Masayuki,Azuma：“通过用 SV40 ori 突变体脱氧核糖核酸转染，使具有导管肌上皮、腺泡或鳞状表型的正常人唾液腺细胞永生化。”