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ヒト胎盤における血管内皮型-酸化窒素合成酵素の局在と発現に関する研究

血管内皮型一氧化氮合酶在人胎盘中的定位及表达研究

基本信息

批准号：
06771356
负责人：
飯田幸雄
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト正常分娩満期胎盤の非可溶性分画ならびに可溶性分画の両者より2^1,5^1-ADP agaroseならびにcalmodulin-agaroseの2つのffinity columnsを用いて一酸化窒素合成酵素(Nitric oxide synthase:NOS)を精製した。非可溶性分画ならびに可溶性分画の両者からともにSDS電気泳動上、分子量約135kDaの蛋白として単離された。完全精製の段階における酵素学的解析は、その活性の消失が迅速なため、未だ行っていないが、ADP agaroseにおける部分精製の段階では高い[3H]-L-arginineから[3H]-L-citrullineへの変換活性が認められ、また、この活性は一酸化窒素合成酵素の特異的阻害物質であるL-NMMAによって完全に抑制された。しかもADPプールのうちの135kDaの蛋白は、既に発表されているヒト血管内皮型NOSのアミノ酸配列のうちのC末端、約17アミノ酸残基の合成ポリペプチドに対する抗体にウエスタンブロットにおいて反応した。以上の事から、ヒト胎盤より2つのaffinity columnsによって精製された135kDaの蛋白は明らかにNOSであり、かつその分子量と抗原性から、血管内皮型NOSであることが判明した。この血管内皮型NOSに対する抗体を用いた免疫組織化学的検討では、ヒト正常分娩満期胎盤における血管内皮型NOSの局在は、胎児血管内皮のみならず、ジンチチウム細胞の刷子縁にも局在する事が判明した。更に,妊娠初期絨毛においてもジンチチウム細胞の同部位における局在を認め,血管内皮型NOSが全妊娠経過を通じて発現していることが示された。よって、ヒト胎盤においては構成的に血管内皮型NOSが発現しており、NOの生理学的作用の一つである血小板凝集抑制作用や可溶性グアニレートサイクレース活性化による平滑筋の弛緩作用を考え合わせると、NOが妊娠維持機構に非常に重要な役割をはたしている事が示唆された。

During normal labor, non-soluble fractions of placenta and soluble fractions of placenta were purified by 2^1,5^1-ADP agar and calmodulin-agar and 2 affinity columns using Nitric oxide synthase (NOS). The soluble fraction is a protein with a molecular weight of about 135kDa. Enzymatic analysis of the completely refined phase shows that the activity of the enzyme disappears rapidly, and the activity of the enzyme disappears completely. The 135kDa protein of the ADP protein chain was synthesized by the C-terminal, approximately 17 amino acid residues of the endothelial NOS protein chain. The above events, placenta, affinity columns, purification, 135kDa protein, NOS, molecular weight, antigenicity, vascular endothelial NOS were identified. Immunohistochemical studies using antibodies against endothelial NOS revealed the presence of endothelial NOS in placenta during normal labor and fetal endothelial cells. Furthermore, in the early pregnancy, the villi and the same part of the villi cells were identified, and the vascular endothelial NOS was found in the whole pregnancy. NO plays an important role in the maintenance of pregnancy.