ヒト胎盤における血管内皮型-酸化窒素合成酵素の局在と発現に関する研究

血管内皮型一氧化氮合酶在人胎盘中的定位及表达研究

• 批准号: 06771356
• 负责人: 飯田 幸雄
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771356/
• 关键词: 一酸化窒素; 一酸化窒素合成酵素; 胎盤; ジンチチウム細胞; 血管内皮細胞

ヒト正常分娩満期胎盤の非可溶性分画ならびに可溶性分画の両者より2^1,5^1-ADP agaroseならびにcalmodulin-agaroseの2つのffinity columnsを用いて一酸化窒素合成酵素(Nitric oxide synthase:NOS)を精製した。非可溶性分画ならびに可溶性分画の両者からともにSDS電気泳動上、分子量約135kDaの蛋白として単離された。完全精製の段階における酵素学的解析は、その活性の消失が迅速なため、未だ行っていないが、ADP agaroseにおける部分精製の段階では高い[3H]-L-arginineから[3H]-L-citrullineへの変換活性が認められ、また、この活性は一酸化窒素合成酵素の特異的阻害物質であるL-NMMAによって完全に抑制された。しかもADPプールのうちの135kDaの蛋白は、既に発表されているヒト血管内皮型NOSのアミノ酸配列のうちのC末端、約17アミノ酸残基の合成ポリペプチドに対する抗体にウエスタンブロットにおいて反応した。以上の事から、ヒト胎盤より2つのaffinity columnsによって精製された135kDaの蛋白は明らかにNOSであり、かつその分子量と抗原性から、血管内皮型NOSであることが判明した。この血管内皮型NOSに対する抗体を用いた免疫組織化学的検討では、ヒト正常分娩満期胎盤における血管内皮型NOSの局在は、胎児血管内皮のみならず、ジンチチウム細胞の刷子縁にも局在する事が判明した。更に,妊娠初期絨毛においてもジンチチウム細胞の同部位における局在を認め,血管内皮型NOSが全妊娠経過を通じて発現していることが示された。よって、ヒト胎盤においては構成的に血管内皮型NOSが発現しており、NOの生理学的作用の一つである血小板凝集抑制作用や可溶性グアニレートサイクレース活性化による平滑筋の弛緩作用を考え合わせると、NOが妊娠維持機構に非常に重要な役割をはたしている事が示唆された。

Youdaoplaceholder0 normal delivery with a full placenta <s:1> insoluble fraction ならびに soluble fraction <s:1> two よ <s:1> 2^1,5^1-ADP agaroseならびにcalmodulin-agarose <e:1> 2 <s:1> ffinity columnsを with て て Nitric oxide synthase:NOS)を refined た. Non soluble points draw な ら び に soluble points draw の struck the か ら と も に SDS electric 気 swimming on, the molecular weight of about 135 kda protein の と し て 単 from さ れ た. The complete refinement of the における enzyme analysis of the <s:1> stage における enzyme shows that the <s:1> active enzyme disappears が rapidly なため, and no だ is carried out って って な が が が, ADP Agarose に お け る part refined の Duan Jie で は high い [3 h] - L - arginine か ら [3 h] - L - citrulline へ の variations in active が recognize め ら れ, ま た, こ の active は acidification smothering の synthetic enzyme specific resistance against material で あ る L - NMMA に よ っ て に completely inhibit さ れ た. し か も ADP プ ー ル の う ち の 135 kda protein の は, both に 発 table さ れ て い る ヒ type ト endothelial NOS の ア ミ ノ acid with column の う ち の C terminal, about 17 ア ミ ノ acid residues の synthetic ポ リ ペ プ チ ド に す seaborne る antibody に ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に お い て anti 応 し た. Above の matter か ら, ヒ ト placenta よ り 2 つ の affinity columns に よ っ て refined さ れ た 135 kda protein の は Ming ら か に NOS で あ り, か つ そ の molecular weight と antigenicity か ら, vascular endothelial NOS で あ る こ と が.at し た. Type こ の endothelial NOS に す seaborne を る antibody with い た of immunohistochemical 検 で は, ヒ ト against normal childbirth period placenta に お け る endothelial NOS の bureau in は, tire where endothelial の み な ら ず, ジ ン チ チ ウ ム cells の brush try に も bureau in す る matter が.at し た. More に, first trimester villi に お い て も ジ ン チ チ ウ の ム cells with parts に お け る bureau in を め, type vascular endothelial NOS が whole pregnancy ever 経 を tong じ て 発 now し て い る こ と が shown さ れ た. よ っ て, ヒ ト placenta に お い て は type に composed of vascular endothelial NOS が 発 now し て お り, NO one of の の physiology functions つ で あ る platelet aggregation inhibition や soluble グ ア ニ レ ー ト サ イ ク レ ー ス activeness に よ る smooth muscle の を exam え relaxation action of わ せ る と, NO が pregnancy maintaining institutions に cut very important な に service を は た し て い Youdaoplaceholder0 acts が incites された.

项目成果

飯田幸雄 他: "一酸化窒素合成酵素" 産婦人科の世界. 46. 761-766 (1994)

Yukio Iida 等人：“一氧化氮合酶”《妇产科世界》46. 761-766 (1994)。