伝達物質放出機構における細胞骨格系蛋白質の役割

细胞骨架蛋白在递质释放机制中的作用

• 批准号: 06780659
• 负责人: 今泉 美佳
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Sophia University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780659/
• 关键词: 開口放出機構; 伝達物質放出; 細胞骨格系蛋白質; ミオシン軽鎖キナーゼ; アクチン; ミオシン; 高透過性細胞; クロマフィン細胞

本研究の目的は、神経伝達物質放出のモデル系として培養牛副腎クロム親和細胞(leaky細胞)を用いて、ミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)の作用機序を明らかにして、その基質であるミオシン及びアクチンを始めとする細胞骨格系蛋白質の開口放出における役割を明確にすることである。界面活性剤であるジギトニン処理により高透過性化したクロム親和細胞(leaky細胞)を用いて、カテコールアミン放出測定実験、及び組織化学的実験を行い、以下の結果を得た。(1)ミオシン軽鎖キナーゼの特異阻害剤(wortmannin)と活性阻害ペプチド(SM-1)を細胞を用いてleaky細胞からのCa^<2+>依存性カテコールアミン放出の変化を測定したところ、ATP依存性放出が顕著に抑制された。測定解析の結果、MLCKは開口放出機構のうち、ATP依存性プライミング過程の必須因子であることが明らかになった。(2)MLCKによってリン酸化されたミオシンは次のステップとして、アクチンと相互作用をもつことによりアクチンを活性化することが知られている。そこで、wortmanninによるMLCKの阻害によって開口放出を阻害したときのアクチン・ネットワークの変動を蛍光組織化学法により測定解析した。Control細胞では、細胞膜直下にリング状に濃いアクチン層が観察されるが、Ca^<2+>刺激後ではアクチン層の切断、欠落が観察された。一方、Wortmanninで前処理すると、細胞膜直下のアクチン層の切断、消失が観察され、その後Ca^<2+>刺激を行っても変化が見られなかった。これらの結果から、アクチン-ミオシン相互作用の阻害により細胞膜直下のアクチン層の形成が阻害されること、さらにアクチン・ネットワークが顆粒の形質膜への接近を妨げるバリヤ-としての役割以外に、顆粒のプライミングに重要な役割を持つことが示唆された。今後更にこの解析を進めることは、開口放出のプライミングの分子機構の解明に非常に重要であると思われる。

In this study, the objective and objective of this study is to release the parturients and cells (leaky cells) of healthy cattle. The order of the action mechanism is to show that the proteins in the cellular bone system are clearly displayed at the opening of the protein end of the cell bone system protein chain. The interfacial activity was measured by scanning electron microscopy. The results of the following results show that the leaky cell and the cell (the cell) were measured by the micrometer, the enzyme emission assay, and the tissue chemistry test. The main results are as follows: (1) the active blocking agent (wortmannin), the active inhibitor (SM-1), the cell, the leaky cell, the lt;2+> dependent cell, the ATP dependent cell, the active inhibitor, the active inhibitor, the inhibitor, the inhibitor. The results of the test and analysis, the opening of the MLCK port, and the process of ATP dependent testing must be determined to determine the accuracy of the results. (2) MLCK spores were acidified and activated, and the interactions between them were observed. The optical tissue chemical method is used to determine the optical tissue chemical method of the optical tissue chemical method, which is used to prevent the opening of the MLCK device. The cells of Control were cut off after stimulation of Ca ^ & lt;2+>, and the missing cells were cut off. On the other hand, the membrane was cut off, disappeared and then stimulated by Ca ^ & lt;2+> in front of the Wortmannin. The results showed that the results of the interaction between the two parts of the body showed that the membrane was directly below the cytomembrane, and the formation of the membrane was characterized by the formation of a membrane in the shape of a grain. the results showed that the membrane was in the shape of particles, and that the membrane was close to the membrane. In the future, we will make further analysis and open the door to the molecular organization to explain that it is very important for us to think about it.

项目成果

今泉美佳,熊倉鴻之助: "開口放出と3量体Gタンパク質" 細胞工学 特集・神経伝達物質の放出機構. 13. 373-380 (1994)

Mika Imaizumi、Konosuke Kumakura：“胞吐作用和三聚体 G 蛋白”细胞工程专题：神经递质释放机制。13. 373-380 (1994)

Kumakura,K et al.: "Essential role of myosin light chain kinase in the mechanism for MgATP-dependent priming of exocytosis in adrenal chromaffin cells." J.Neurosci.14. 7695-7703 (1994)

Kumakura,K 等人：“肌球蛋白轻链激酶在肾上腺嗜铬细胞中 MgATP 依赖性胞吐作用启动机制中的重要作用。”

Ohara-Imaizumi,M.et al.: "Changes of cytoskeleton during Ca^<2+>-evoked exocytosis in digitoninpermeabilized adrenal chromaffin cells" Neurosci.Res.S19. S102- (1994)

Ohara-Imaizumi，M.等人：“洋地黄皂苷渗透性肾上腺嗜铬细胞中Ca^2诱发的胞吐作用期间细胞骨架的变化”Neurosci.Res.S19。