六価クロムの毒性発現機構と微生物の六価クロム還元酵素に関する研究
六价铬及微生物六价铬还原酶的毒性表达机制研究
基本信息
- 批准号:06760296
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1994
- 资助国家:日本
- 起止时间:1994 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.Pseudomonas ambigua G-1株の生産する六価クロム還元酵素を高度に精製し、そのN-末端のアミノ酸配列を20アミノ酸残基について決定した。この配列を、既知のアミノ酸配列のデーターベースに対しホモロジーの検索を行ったが、顕著な類似性を示す配列は得られなかった。決定したアミノ酸配列を基に、56ベースの合成DNAプローブを作製し、ラムダファージをベクターとしたP.ambigua G-1株の染色体DNAライブラリーよりクローニングを行った。その結果、3株のポジティブクローンを得、現在その塩基配列の決定を行っている。2.電子スピン共鳴法を用いたin vitro解析から、六価クロムの毒性発現には、六価クロムが、細胞内で1電子還元されて生成する、五価クロム中間体の役割が、細胞内の過酸化水素と反応し、ヒドロキシラジカル(・OH)を生成し、これがDNA、脂質やタンパク質と反応することにより、細胞を死に追いやることが、予想されている。この反応が、in vivoでも成り立つか否かを明らかにするため、Escherichia coli K-12のカタラーゼ欠損変異株用い、六価クロムの毒性に対する過酸化水素の影響を検討した。その結果、確かに細胞外から加えた過酸化水素は、カタラーゼ欠損変異株において六価クロムの毒性を著しく増強した。その効果は、カタラーゼクローン株では抑制された。また、・OHのスカベンジャーとして知られるマンニトールを加えた場合に生菌数の減少はほぼ完全に抑制された。このことから、細胞内で、過酸化水素が、クロム分子種と反応しヒドロキシラジカルが発生し、細胞を死に至らしめるというモデルが、Escherichia coliにおいて成立することが明らかになった。また同時に、1mM以下の比較的低い六価クロム濃度においては、過酸化水素とヒドロキシラジカルが関与せず、クロムがDNAと直接反応してニックを形成するるという新しいタイプの毒性発現機構が存在することが示唆された。
1. The production of Pseudomonas ambigua G-1 strain is highly refined, and the N-terminal amino acid sequence is determined by 20 amino acid residues. This arrangement is known to be based on the relationship between the two elements. To determine the sequence of DNA fragments of P. ambigua G-1 strain, 56 DNA fragments were synthesized. The results of the three strains were obtained and the base alignment was determined. 2. The electron resonance method is used in vitro analysis, toxicity development, intracellular electron reduction, cleavage of intermediates, intracellular hyperacidification, production of hydroxyl (OH), DNA, lipid, and protein, and cell death. To investigate the effects of hyperacidified water on the toxicity of Escherichia coli K-12 and its mutants. As a result, the toxicity of extracellular hormones increased. The fruit of the tree is the fruit of the tree. The number of bacteria was reduced completely when the number of bacteria was increased. This is the first time that a cell has been infected with a virus. The first time that a virus has been infected with a virus, the second time that a virus has been infected with a virus, the third time that a virus has been infected with a virus. At the same time, a relatively low concentration of hexachlorone below 1mM indicates the presence of a new toxic mechanism for DNA and direct reaction.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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