表皮基底膜形成過程における内在性β-ガラクトシド結合性レクチンの発現

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今回、14kD-レクチンのニワトリ胚真皮における局在をin vivo並びにin vitro系を用いて組織化学的に検討した。ニワトリ胚(孵卵13、15、17、20日齢)脚部の皮膚を、4%ホルムアルデヒドで室温、1時間固定後、2.3Mショ糖に浸漬し、凍結準超薄切片を作製し、抗14K-レクチン抗体と反応させ、螢光法にて局在部位を光顕的に観察した。また孵卵13日ニワトリ胚脚部より皮膚を採取、ハイドロコーチゾン(HC,10^<-8>M)あるいはレチノール(20μg/ml)を添加した培地にて培養した後、同様に処理した。また電顕観察には、前固定後、Lowicryl k4m包埋超薄切片を作製、抗14K-レクチン抗体を作用させ、コロイド金を用いた間接標識法により結合部位を可視化した。ニワトリ胚(孵卵13日齢)の未分化な皮膚(脚部)をEDTA(0.4%,37℃、30分間)またはDispase(1000 units/ml、37℃、30分間)処理により表皮と真皮とを分離し、基底膜を除去する。このようにして得た表皮と真皮とを再結合し、ミリポアフィルターに貼り付け、合成培養液(BGJb)にて培養し、上記と同様の方法にて14kD-レクチンの局在を経時的に観察した。光顕的に観察すると、in ovo,in vitro系いずれの場合にも、未分化の皮膚では真皮における反応は微弱であった。表皮の角化に伴って真皮の反応が増強した。またretinol投与により粘液化生を来した表皮では、14kD-レクチンの発現は抑制されるのに対し、真皮では発現は抑制されなかった。電顕的には基底膜、細胞外基質、一部の線維芽細胞の細胞質と核に陽性反応が見られた。表皮真皮再結合実験より基底膜形成過程において14kD-レクチンは真皮のほとんどの線維芽細胞において産生され、早い時期から基底膜の形成に預かることが明らかになった。以上の結果から真皮における14kD-レクチンは皮膚の分化に伴ってその発現が変化し、また基底膜の形成過程に関与することが示唆された。