インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼの分子解剖学

流感病毒RNA聚合酶的分子解剖学

• 批准号: 06770231
• 负责人: 豊田 哲也
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770231/
• 关键词: インフルエンザウイルス; RNAポリメラーゼ; 転写; 複製; 組み換えバキュロウイルス; 組み換えワクチニアウイルス

インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼはPB2、PB1、PAという3つのサブユニット構造からなり、ゲノムの転写、複製共につかさどる複合酵素であり、RNAポリメラーゼで初めてRNase活性が検出された酵素でもある。申請者らは、これまでにウイルス粒子由来のRNAポリメラーゼ及び、バキュロウイルスにより発現し、精製したそれぞれのサブユニットを再構成したRNAポリメラーゼを用いて、ゲノムの第8分節の両端を持ったモデル鋳型とプライマーに依存した転写活性を検出してきた。これまで、主に温度感受性変異株とクロスリンク実験により、PB2サブユニットに真核細胞mRNAのキャップ構造を認識してそれに結合し、切る活性があり、PB1サブユニットにはRNA合成活性があることが推定されてきたが、今回、それぞれのサブユニットを単独、及び、すべての組み合わせで、組み換えバキュロウイルス、組み換えワクチニアウイルスの系で発現させ、そこから抽出した核抽出液を用いて、PB1サブユニット単独でも、モデル鋳型依存性にRNA合成活性を検出することに成功した。また、試験管内におけるモデル鋳型RNAの複製には、PB2、PB1、PAの3つのサブユニットがそろった完全なポリメラーゼ複合体が必要であることも明かとなった。そして、この完全なポリメラーゼ複合体だけでなく、PB1PB2複合体においても、グロビンmRNAをプライマーとして転写反応を行うことができることを示唆した。以上、PB1は、RNA合成を行い、PB1PB2複合体は転写酵素、そして、すべてのサブユニットがそろった完全なポリメラーゼ複合体は、転写、複製酵素として機能することを示唆した。

The enzyme complex, RNA complex, The applicant shall, in accordance with subsection 8 of the Rules of Procedure, determine the origin of the RNA fragment and the expression, refinement and re-composition of the RNA fragment. PB2, PB1, PB3, PB4, PB5, PB6, PB7, PB8, PB9, PB The RNA synthesis activity was successfully detected in PB1, PB2, PB3, PB4, PB6, PB7, PB8, PB9, PB9 The replication of PB2, PB1, PA and RNA is necessary for the complete replication of RNA. The PB1 PB2 complex is a complex of DNA and DNA. The PB1 and PB2 complexes are fully functional in RNA synthesis.

项目成果

Makoto Kobayashi: "Molecular dissection of influenza virus nucleoprotein (NP):Deletion mapping of RNA binding domain." Journal of Virology. 68. 8433-8436 (1994)

Makoto Kobayashi：“流感病毒核蛋白 (NP) 的分子解剖：RNA 结合域的删除图谱。”