インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼによるウイルスゲノム複製機構の解析

流感病毒RNA聚合酶分析病毒基因组复制机制

• 批准号: 05770220
• 负责人: 豊田 哲也
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770220/
• 关键词: インフルエンザウイルス; RNAポリメラーゼ; 複製; モデルRNA鋳型; 宿主因子

インフルエンザウイルスは、8本の(-)鎖RNAをゲノムとして持ち、感染した宿主細胞核内でPB1、PB2、PAという3つのサブユニットからなるRNAポリメラーゼを用いて、転写、複製を行なう。これまでにウイルス粒子から精製したRNAポリメラーゼにより、転写についての研究は進んでいたが、ウイルス粒子由来のRNAポリメラーゼでは、複製活性は検出できず、その研究は遅れていた。今回、インフルエンザウイルスゲノムRNAの複製を試験管内で行なわせるために、ゲノム第8分節の両末端を持つ53ヌクレオチドのモデル鋳型を用いて、プライマー非依存性に行なわれるRNA合成を指標にして、ウイルス感染細胞から複製活性を持つRNP画分を抽出した。このRNP画分は、0.5MKClを含むグリセリン濃度勾配遠心にて分画することにより、ジヌクレオチドApG依存性の転写活性は保持したが、複製活性は喪失した。そして、その遠心上清画分又は、非感染細胞核抽出液と混合することにより、ゲノム複製活性を回復した。この0.5MKClを含むグリセリン濃度勾配遠心にて分画した感染細胞RNPには、ウイルス成分として、NPとRNAポリメラーゼのみが存在することが、BioRadの装置を用いたウエスタンブロットにより確認された。以上、インフルエンザウイルスゲノムRNA複製をモデル鋳型を用いて、試験管内で、その全過程を再現し、複製には、感染細胞内におけるNPとRNAポリメラーゼ、及び、宿主細胞由来の因子が、関与していることを明かにした。そして、現在、この因子の同定を行なっている。

The RNA sequence of PB1, PB2 and PA in the nucleus of host cells infected with the virus must be changed, written and replicated. This is the first time that we have studied the origin of RNA molecules and the replication activity of RNA molecules. In the present study, the RNA replication assay was performed in vitro, and the RNA replication assay was performed at the end of subsection 8. The RNA replication assay was performed in vitro. The RNP assay was performed at a concentration of 0.5M KCl, and the APG dependent assay activity was maintained at a concentration of 0.5M KCl. In addition, the replication activity of non-infected cell nuclear extracts was restored. The concentration of 0.5M KCl was adjusted to the concentration of RNP in infected cells. The presence of RNP and RNA in infected cells was confirmed by BioRad's device. The above mentioned factors are related to the replication of NP and RNA in infected cells, the reproduction of the whole process in the test tube, and the identification of host cell-derived factors. In the meantime, the current situation and the factors are the same.