補体活性化産物Baの自己免疫疾患の発症・進展に及ぼす役割の解析

补体激活产物Ba在自身免疫性疾病发生和进展中的作用分析

• 批准号: 06770338
• 负责人: 堀内 孝彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770338/
• 关键词: 補体; B因子分解産物; 自己免疫疾患

本研究の目的は、補体活性化の結果B因子が分解されて生じるBaの免疫機構における役割を明らかにすることにある。私共は大量のBaを得る方法として、組み換えBaを作製することとした。既にヒト肝臓Xgt11 cDNAライブラリーより、完全な長さのB因子cDNAを得ていたため、これをもとに組み換えBa(rBa)を得ることとした。B因子分解産物Baは、B因子のアミノ基側の1/3に当たる234個のアミノ酸より構成されている。Baのカルボキシル基末端のアミノ酸である234番目のArgの直後のLysをコードするコドン(AAG)にsite-directed mutagenesisにより終止コドン(TAG)を導入したミュータントBaを作成し、塩基配列も確認した。このミュータントを発現ベクターp91023のクローニング部位に組み込み、CHO細胞に永久的に発現することに成功した。rBaはウェスタンブロットにて、正常ヒトB因子より調整したnative Baと分子量が同一であることを確認した。現在CHO細胞を大量に培養し、その上清より、マウス抗Baモノクローナル抗体(FD3-20)により作成したアフィニティーカラムを用いて、rBaを精製し、大量に得る予定である。このrBaを用いて(1)^<125>Iで標識したrBaを作成し、Bリンパ球上の受容体を確認し、更に受容体の精製・分離を、モノクローナル抗体FD3-20を用いた免疫沈降にて行なう。N末端よりアミノ酸のシークエンスを解析し、Bリンパ球cDNAライブラリーよりBaの受容体のcDNAクローニングを試みる。(2)rBaをBリンパ球のみならず、Tリンパ球、単球にも作用させ、機能変化を解析する予定である。

The purpose of this study was to investigate the results of factor B factor decomposition. The immune mechanism of Ba was used to detect the disease. In private, a large number of Ba users have obtained information about the methods, and the organization of the Ba has done a lot of research work. Both the liver Xgt11 cDNA and the full growth factor B cDNA were improved, and the Ba (rBa) was successfully tested. Factor B decomposition compound Ba and factor B regression base cycle 1 cycle 3 cycles were transformed into two hundred and thirty-four amino acids. Ba

项目成果

Horiuchi,T.et al.: "NFI gene mutation and acute myelogenous leukaemia" European Journal of Cancer. 30A. 129 (1994)

Horiuchi,T.et al.：“NFI 基因突变与急性髓性白血病”欧洲癌症杂志。

Watanabe I,Horiuchi T et al.: "Role of protein kinase C activation in synthesis of complement components C2 and factor B in IFN-γ-stimulated human fibroblasts,glioblastoma cell line and monocyte" Biochemical Journal. 305. 425-431 (1995)

Watanabe I、Horiuchi T 等人：“蛋白激酶 C 激活在 IFN-γ 刺激的人成纤维细胞、胶质母细胞瘤细胞系和单核细胞中合成补体成分 C2 和因子 B 中的作用”《生化杂志》305. 425-431（1995 年）。 ）

Horiuchi T,et al.: "Human complement factor B. cDNA cloning,nucleotide sequencing,phenetypic conversion by site-directed mutagenesis and expression" Molecular Immunology. 30. 1587-1592 (1993)

Horiuchi T 等人：“人类补体因子 B. cDNA 克隆、核苷酸测序、通过定点诱变和表达进行表型转换”分子免疫学。

Horiuchi,T.et al.: "Nonsense mutations at Arg-1947 in two cases of familial neurofibromatosis type I in Japanese" Human Genetics. 93. 81-83 (1994)

Horiuchi,T.et al.：“日本两例 I 型家族性神经纤维瘤病中 Arg-1947 的无义突变”《人类遗传学》。